라이트의 얼룩 기초, 재료, 기술 및 용도



그 얼기의 얼룩 는 미국의 병리학자인 제임스 호머 라이트 (James Homer Wright)가 1902 년에 로마노 키의 얼룩으로부터 만들어 낸 색채 기법이다. Romanowsky의 얼룩이 불안정 할 때, Wrigth는 용매와 정착액으로 메탄올을 포함 시켰습니다.

이 착색은 다색성입니다. 즉 염료가 흡수하는 구조에 따라 여러 가지 색상을 생성합니다. 이 염색 기술은 백혈구 수의 차이를 측정하고 말초 혈액 및 골수에서 적혈구, 혈소판 및 백혈구의 형태를 연구하는 데 널리 사용되었습니다..

백혈병이나 박테리아 또는 기생충 감염과 같은 질병의 진단을 돕고 혈액의 다른 세포주에서 이상이 보여지기 때문에 그 적용은 매우 중요합니다..

아마도이 기술이 사용되는 가장 일반적인 응용 프로그램 일 수 있지만 유일한 기술은 아닙니다. 또한 혈액 및 골수 이외의 샘플 (예 : 비강 분변, 분변 점액, 객담, 피부 등)에도 유용합니다..

색인

  • 1 Wright의 얼룩의 기초
  • 2 재료
    • 2.1 준비
    • 2.2 완충 용액
    • 2.3 착색을 수행하는 데 필요한 추가 자료
  • Wright 's 얼룩의 3 개 분대
    • 3.1 메탄올
    • 3.2 완충 장치
    • 3.3 Eosin (Y)
    • 3.4 메틸렌 블루
  • 4 기술
  • 5 유틸리티
    • 5.1 혈액학
    • 5.2 비강 분비
    • 5.3 기생충학
    • 5.4 호흡기 감염
    • 5.5 세균학
    • 5.6 균종학
  • 6 라이트의 얼룩으로 혈액 샘플의 구조가 어떻게 관찰됩니까??
  • 7 좋은 염색을위한 권장 사항
  • Wrigth 채색의 8 가지 실수
    • 8.1 매우 희미한 염색
    • 8.2 착색제의 침전물
    • 8.3 극히 붉거나 푸른 착색이있는 번짐
  • 9 저장 모드
  • 10 참고 문헌

라이트의 얼룩 기초

라이트의 얼룩은 로마노 스키의 얼룩으로부터 태어났다.이 염색약은 산성 염료 (에오신 Y)와 염기성 염소 (메틸렌 블루)의 메틸 알코올 용액과 그 산화 생성물로 구성되어있다..

Wright의 얼룩에 사용 된 염료의 혼합물은 Romanowsky로 알려진 효과를 일으 킵니다. 즉, 적혈구가 분홍색으로 염색되는 동안 그것은 백혈구의 핵 및 호중구 과립에 아름다운 보라색 착색을 제공합니다..

Wright 염색의 전형적인 색상 범위를 제공하는 구성 요소는 청색 B와 에오신 Y입니다. 관찰 된 효과는 염료가 화학 구조에 결합하고 청색 B와 에오신 Y의 상호 작용에 달려 있습니다.

핵산, 핵 단백질 및 일부 세포 유형의 반응성 미성숙 세포질과 같은 산성 구조는 청색 B (염기성 염료).

헤모글로빈 (heosoglobin)과 같은 기본 구조, 다른 세포 구조 중 분열 된 호산구의 과립은 에오신 Y (산성 염료).

염색의 결과는 Wright 염료의 pH, 완충 용액 및 세척 용액과 같은 다른 요인에 의해 영향을받을 수 있습니다. 염색 및 정착 시간.

따라서 시약 준비의 각 단계는 중요하며 모든 세부 사항을 처리해야합니다.

재료

라이트 채색. 100 mL의 경우 다음이 필요합니다.

0.3 g의 라이트 염료를 가하고 메탄올 97 ml와 글리세롤 3 ml를 측정한다..

준비

박격포에서 Wright 염료의 무거운 양을두고 가루가 완전히 녹을 때까지 천천히 글리세롤을 첨가하십시오..

이어서, 메탄올을 첨가하고, 혼합하고, 호박 병에 부었다.

사용 전에 용액을 부드러운 움직임과 필터로 흔들어야합니다.

버퍼 된 버퍼

1 리터의 증류수에 3.76g의 인산염이 나트륨 (Na2HPO4   2H20) + 2.1 g의 인산이 수소 인산염 (KH)2PO4).

모든 시약이 용해 될 때까지 잘 혼합하십시오. pH를 7.2로 조정하십시오. 유리 병에 부어 실온에서 보관하십시오..

착색을 수행하는 데 필요한 추가 자료

또한 물체를 운반하거나 물체를 덮는 시트, 착색의 다리, 물 또는 세척을위한 완충 용액, 착색 시간을 잡을 수있는 스톱 워치 및 일부 건조 물질을 포함한 시트는 착색 기술을 수행하는 데 필요합니다. (흡수성 종이, 거즈 또는면).

라이트 얼룩 구성 요소

메탄올

알코올 (메탄올)은 슬라이드에 혈액 도말 정착 제 역할을합니다..

기본적으로 환원 시약, 탈수기 및 응고제 정착액입니다. 따라서 그 기능은 단백질을 응고시켜 이들을 불용성으로 만들지 만 변성시키지 않고.

메탄올은 에탄올로 얻은 결과보다 더 나은 결과를 제공하므로 모든 실험실에서 번짐을 해결하는 데 가장 널리 사용되는 시약입니다. 이상적인 농도는 99 %.

충격 흡수 장치

완충액 (완충 용액)은 세포 구조가 염료를 적절하게 흡수하기 위해 pH를 7.2로 조정했기 때문에 염료의 pH를 조절하거나 유지하는 기능이 있습니다.

다른 한편으로, 메탄올 고정의 통과는 세포를 탈수시키고 완충액은 그들을 재수 화 시키는데 도움을 준다..

에오신 (Y)

에오신은 산성 염료이기 때문에 기본 성분에 친 화성이 있습니다. 두 가지 유형의 에오신은 서로 매우 유사하므로 둘 중 하나를 사용하여 동일한 결과를 얻습니다.

하나는 eosin Y, 노란색 eosin 또는 tetrabromofluorescein 그리고 다른 eosin B, 푸른 색 erythrosin B 또는 dibromodinitrofluorescein이라고합니다. 그러나, eosin Y는 가장 일반적으로 사용되는.

이 염료의 가장 중요한 특성은 음극이며, 이것은 세포 구조에 의해 양전하를 띈다..

메틸렌 블루

그것은 기본적인 채색입니다. 그것의 주요 재산은 metachromasia, 즉, 모든 구조가 동일한 색깔로 염색 될 예정은 아니지만, 그것은 착색하고있는 구조물의 화학적 조성에 달려있다..

일부는 밝거나 진한 파란색으로 바뀌고 다른 일부는 어두운 보라색 또는 창백한 라일락으로 바뀝니다..

기술

1 - 슬라이드 또는 coverslip에 얇은 필름이 남도록 샘플의 퍼짐을 수행합니다..

2 - 약 2 시간 동안 공기 건조 시키십시오..

3 - 샘플을 위쪽으로 펼친 상태로 얼룩이는 다리 또는 염색 트레이에 마른 얼룩을 놓습니다..

4 - 전체 표면을 덮을 때까지 Wright 염료 방울을 사용하여 시트를 덮습니다. 5 분에서 8 분간 그대로 두십시오..

5- 염료가 가장자리를 넘치지 않고 슬라이드를 완전히 덮어야합니다. 착색 시간이 시작될 때 증발하기 시작하면 추가로 떨어 뜨려야한다..

6 - Shock absorber를 같은 양만큼 넣은 후 특유의 금속성 광택이 나타날 때까지 조금만 불어 넣습니다. 10 분에서 15 분 정도 걸리십시오..

7 - 수돗물로 씻어서 시트가 분홍색으로 보일 때까지 부드러운 제트기를 놓습니다..

8 - 알코올을 함침시킨 거즈로 슬라이드 뒤쪽에 부착 된 염료를 제거하십시오..

9 - 침지 오일을 현미경으로 시각화하기 전에 얼룩을 잘 말리십시오..

유틸리티

혈액학

말초 혈액 도말 검사, 두꺼운 혈액 도말 검사 및 골수 표본 세포 검사에 이상적입니다..

이 염료 조합의 화학적 특성으로 인해 세포 구조가 쉽게 인식되어 현재 존재하는 여러 유형의 세포를 구별 할 수 있습니다.

코 분비

이 기술은 알레르기 성 비염의 진단에서 코 분비물 (상피 세포, 분열 된 호산구, 다형 핵)을 확인하는데 매우 유용합니다.

기생충학

이러한 의미에서, Leishmania sp 피부 궤양에있는 피하 세포 조직의 조직 세포 내에 존재한다. 마찬가지로 대변 샘플 (대변 백혈구)에서 백혈구를 확인하는 데 사용됩니다..

이 경우 의사는 대변에있는 백혈구가 다형 핵 또는 단핵 세포인지 여부를 알아야합니다. 대변이있는 백혈구에서의이 발견은 그것이 각각 세균성 또는 바이러스 성 감염인지 여부를 안내 할 것입니다.

다른 한편으로, 혈액 속에 순환하는 기생충은 적혈구 내부에서 발견되거나 혈장에서 자유롭게 발견 될 수 있습니다. 원하는 기생충은 Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii 및 phariarias, 수의학에서 그것은 수색에 유용합니다 테 릴레 아 균등 및 Babesia caballi, 아기의 원인균, 특히 말의 원인균.

Wright와 Giemsa 염색은 hemoparasites를 정상 세포 구성 요소와 구별 할 수 있습니다. 이를 위해 두 가지 유형의 스프레드를 사용할 수 있습니다.

좋은 뻗기

혈액은 슬라이드에 얇은 필름처럼 펼쳐져 있습니다. 라이트의 얼룩으로 염색되어 핵과 세포질의 특성을 드러냅니다.

두꺼운 방울

이 방법론은 더 많은 양의 혈액에서 기생충의 존재를 조사하는 데 사용됩니다.

이를 위해, 큰 방울의 피가 슬라이드에 놓입니다. 일단 거기에서, 당신은 다른 슬라이드의 가장자리를 사용하여 중심에서 바깥쪽으로 크고 큰 원을 만들고, 제세동해야합니다.

마지막으로, 두꺼운 번짐에있는 기생충을 관찰하기 위해, 적혈구는 물로 용해되어야합니다.

호흡기 감염

호흡기 수준에서이 기술은 또한 유용합니다. 왜냐하면 가래 샘플, 기관지 또는 기관지 폐포 세척액에있는 세포가 진단을 확립하는 데 중요하기 때문입니다.

마찬가지로, 다형 핵 세포 및 단핵 세포는 여기서 구별 될 수있다.

세균학

세균학에서이 기술의 사용은 제한적입니다. 박테리아를 염색하는데 좋지 않기 때문입니다. 그 이유는 다른 염색 기법이 사용되기 때문입니다.

그러나, 그것은의 봉입 기관과 상피 세포를 찾는 데 사용되었습니다 클라미디아 트라코마티스 요도 또는 자궁 경부 점막의 얼룩에서, 비록 이것이 최선의 방법이 아니라는 것을 인식해야만한다..

적혈구 중 나선형 박테리아를 관찰하는 것도 가능합니다. 보렐리 아 부르그 도르 페리 감염된 환자, 뮬라 또는 봉입 기관 에를 리키 아 sp 혈액 도말 검사에서 림프구, 단구 또는 호중구의 세포질에서.

균류학

그 Histoplasma capsulatum Wright 's stain으로 염색 된 여러 조직 표본을 현미경으로 관찰하여 빈번히 진단되는 병원성 곰팡이이다..

Wright의 얼룩으로 혈액 샘플의 구조가 어떻게 관찰 되는지요??

좋은 염색을위한 권장 사항

혈액 샘플의 연장은 자발적으로 공기 건조해야합니다. 도말은 염료의 더 나은 고정을 얻고 과염소산을 피하기 위해 가능한 한 얇아야합니다.

고품질의 염색을 위해서는 얼룩 준비 후 2 시간 동안 염색을 수행하는 것이 좋습니다. 반면에, 이상적인 샘플은 항응고제가없는 모세 혈입니다..

그러나 정맥혈을 사용하는 경우 헤파린이 아닌 EDTA 항응고제로 사용해야합니다. 왜냐하면 후자는 세포 구조를 변형시킬 수 있기 때문입니다.

준비된 착색제의 변색을 방지하려면 건조한 곳에 보관해야합니다.

세척 과정에서 중성 pH로 조정 된 물 사용을 권장합니다.

마지막으로, 실험실에서 자주 사용되는 염색 방법을 너무 자주 테스트하는 것이 좋습니다..

이것은 품질 관리로서 표본이나 확장 된 패턴을 염색함으로써 이루어집니다. 이 단계는 염색이 적절히 준비되고 착색 시간이 잘 표준화되도록하기 때문에 중요합니다..

패턴 시트가 심하게 착색되어 있으면 해결해야 할 문제가 있습니다..

Wrigth 채색의 일반적인 실수

매우 창백한 염색

매우 창백한 얼룩, 대개 매우 짧은 시간의 얼룩 또는 매우 과장된 세탁 때문입니다. 염료와의 접촉 시간을 길게하거나 세탁 시간을 줄임으로써 교정됩니다.

염료 침전물

침전 된 염료 얼룩은 다소 가장 흔한 원인은 여러 가지 원인이있을 수있다 : 교량 염료 필터링되지 않은 염료의 사용은 먼지 또는 그리스 더러운 시트를 사용하여, 불균일 염색 좋은 씻어 할 염색을 끝내라..

극히 붉거나 푸른 착색이있는 번짐

완충액은 착색제의 pH를 담당합니다. 지시 된 (산성)보다 낮은 pH를 갖는 염료는 매우 붉은 얼룩을 나타낼 것입니다.

염료의 pH가 (알칼리성) 이상이면 극히 푸른 색 얼룩이 생깁니다.

저장 모드

시약은 실온에서 보관해야합니다..

참고 문헌

  1. 산 페드로 술라, 온두라스의 도시에서 에를 리키 아증의 진단을위한 라이트 염색 방법과 엘리사 테스트 사이 V. 구티에레즈 비교 연구. 수의사의 직함을 신청하는 학위 논문. 산 카를로스 데 과테말라 대학교.
  2. 로페즈 Jácome L, 헤르 듀란-M, C 콜린 ​​카스트로, 페나 오르-S, G Cerón 곤잘레스, 미생물학 연구소의 F. 프랑코 Cendejas 기본 염료. 장애 연구. 2014; 3 (1) : 10-18.
  3. "라이트의 얼룩." 위키 백과, 무료 백과 사전. 2018 년 5 월 18 일, 12시 5 분 UTC. 2018 년 12 월 8 일, 20:37
  4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. 빈도 Babesia spp. 몬테 리아, 코르도바 (콜롬비아). udcaactual divulgient 목사.  2013; 16 (2) : 451-458.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 아르헨티나 Panamericana S.A 사설.
  6. Retamales E, Mazo V. 칠레 보건 당국 정부. 혈구 수를 판독하기 위해 혈액 얼룩을 염색하기위한 권장 사항.