5 월 Grünwald-Giemsa 기초, 기술 및 사용에 의한 얼룩



그 Grünwald-Giemsa 얼룩 o Pappenheim은 ​​Giemsa와 May Grünwald 시약을 혼합 한 차별적 인 착색 기술입니다. 그것은 말초 혈액 및 골수의 도말뿐만 아니라 조직 절편 및 세포 학적 샘플의 염색에있어 정상 및 비정상 혈액 세포의 분화에 사용됩니다.

시약 (Gemsa와 May Grünwald)은 모두 Romanowsky 형 염색법으로 산성 염료와 염기성 염료의 혼합 기술을 기반으로합니다.

Giemsa는 글리세롤로 에오신, 메틸렌 블루 및 그 유도체의 혼합물을 안정화시킴으로써이 기술을 향상 시켰습니다. 대조적으로, May Grünwald는 메탄올을 용매로 사용하여 에오신과 메틸렌 블루를 사용합니다. 이 전략적 조합은 탁월한 성과를 거두었습니다.

세포 형태를 관찰 환산 김사 라이트와 유사하게 작용하지만,이 기술은 말라리아, 샤 가스, 리 슈만 편모충 증 및 편모충 증을 일으키는 상기 튜닝 착색 기생충 향상.

또한, 그것은 정자 유체의 세포학 연구를위한 매우 유용한 기술로 입증되었습니다. 그것은 단지 정자의 형태 학적 특성을 보여줌으로써하지 강조뿐만 아니라, 매우 효율적으로 백혈구, 상피 세포 및 정자 차별화 된.

색인

  • 1 재단
    • 1.1 다양한 염료
  • 2 기술
    • 2.1 자료
    • 2.2 농축 염료 용액 May Grünwald
    • 2.3 집중된 Giemsa 염료
    • 2.4 pH 7.2에서의 완충 용액의 제조
    • 2.5 혈액 도말 또는 골수 염색 절차
    • 2.6 정자액의 확장 된 착색 기술
    • 2.7 중요한 명세
  • 3 용도
    • 3.1 질 세포학
    • 3.2 정자 샘플
  • 4 참고

재단

이 기술은 Romanowsky의 염색의 기초를 따르며, 염료는 세포 성 염기성 구성 요소에 선택적 친화력을 가지며 산성 구성물은 염기성 염료를 끌어 당깁니다.

달리 말하자면, 세포 구조와 염료 모두 양전하 또는 음전하를 띤다. 균등 요금은 반발하고 다른 요금은 끌린다..

예를 들어, 메틸렌 블루와 같은 기본 염료는 양전하를 띠며 음으로 하전 된 구조에 의해 끌어 당겨진다. 이것이이 염료가 음으로 하전 된 인산염 그룹을 가진 DNA와 RNA가 풍부한 핵을 얼룩지게하는 이유입니다.

RNA를 함유하는 단핵구 백혈구의 분열 된 호염기구 및 세포질의 과립도 또한 염색된다.

마찬가지로, 산성 염료는 음전하를 띠며, 이는 적혈구 및 분열 된 호산구의 과립과 같은 양전하를 띤 구조에 결합하는 이유입니다. 분열 된 호중구의 과립에 관해서는, 이들 모두 염료를 고친다.

다양한 착색제

이 기술에서는 정색 염료와 메타 크로 매틱 사이의 반응 조합이 공존합니다. 직교 색소 (에오신 및 메틸렌 블루)는 그들이 관련된 세포 구조에 결합하고 변화하지 않는 안정한 색상을 제공한다.

다른 한편, metachromatics (methylene blue azure A와 azure B의 파생물)는 특정 구조에 결합되면 원래의 색상이 다양하며, 다양한 색조가있을 수도 있습니다.

마지막으로, May Grünwald 솔루션이 수행하는 단계에는 물이 있어야합니다. 염료가 없으면 고정되어 있지 않기 때문입니다. 염료가 일어나기 위해서는 염료가 극성 또는 이온화되어야하고, 따라서 침전되어 관련 구조에 부착 될 수 있어야합니다.

기술

재료

- 슬라이드 슬라이드.

- 착색 교량.

- May-Grünwald의 해결책.

- 기ema 얼룩.

- 증류수.

농축 염료 용액 May Grünwald

우리는 에오신 - 메틸렌 블루 (May Grünwald에 따른 염료) 0.25g을 달아 메탄올 100ml에 녹여야한다. 혼합물을 1 시간 동안 혼합하고 24 시간 동안 방치한다. 시간이 끝나면 필터가 걸립니다..

월의 Grunwald는 다음 희석 된 염료로 기술을 적용하려면 pH7.2-7.3 조정 (200)이 농축액을 30 ml의 측정 희석 염료 ml의 완충액 20㎖를 첨가하고, 150 ml의 증류수에 대한 . 그런 다음 혼합되어 필터링됩니다..

농축 Giemsa 염료

azur-eosin-methylene blue (Giemsa에 따른 염료) 0.5g을 메탄올 50ml에 녹이고 글리세린 50ml를 혼합물에 넣는다..

이 기술을 수행하려면 완충액으로 1:10으로 희석하고 10 분 동안 휴식을 취하십시오. 필요한 경우 필터링 할 수 있습니다..

pH 7.2에서의 완충 용액의 제조

그들은 무게를 측정해야합니다 :

- 40 mg의 인산이 수소 인산 칼륨 (KH2PO4).

- 151 mg 인산 수소이 나트륨 12 수화물 (Na2HPO4).

두 화합물을 100 ml의 물에 용해시킨다..

혈액 도말 또는 골수 염색 절차

클래식과 패스트의 두 가지 방식이 있습니다..

고전 모드

  1. 희석 된 May-Grünwald 용액으로 2 ~ 3 분 동안 도말을 덮으십시오.
  2. 이전 솔루션을 제거하기 위해 완충 된 증류수로 씻으십시오..
  3. 동일한 완충 용액으로 덮고 1 분 동안 그대로 두십시오. 아이디어는 이전의 염료가 구조물에 고정되어 있고, 동시에 세포가 수화되어 있다는 것입니다.
  4. 완충 된 물에 희석 한 Giemsa 팅크 12 방울을 넣고 불어 넣어 혼합하고 균질화하십시오. 15 ~ 20 분 동안 기다리십시오..
  5. 완충 된 증류수로 도말을 씻고 공기 건조에 놓으십시오.
  6. 초점과 40X 목적을 사용하여 스테인드 혈액 세포를 광학 현미경으로 관찰하십시오. 필요한 경우 100X를 사용할 수 있습니다..

빠른 모드

  1. 1 분 동안 희석 된 May Grünwald 염료로 도말을 덮으십시오..
  2. 완충 된 증류수로 세척.
  3. 완충 된 물로 덮어 1 분 동안 그대로 두십시오..
  4. 희석 한 Giemsa 염료를 놓고 5 분간 그대로 두십시오..
  5. 완충 된 증류수로 씻고 공기 중에서 건조시킨다..

여기에 설명 된 기술은 안내 지침이지만 시약을 제공하는 상업용 주택에 따라 절차와 색상이 달라질 수 있습니다. 각 상업 집에서 엄격히 지시 한 단계를 따르는 것이 좋습니다.

정자 유체 연장 착색 기술

1- 5 월 Grünwald 용액의 얇은 층으로 4 분간 퍼지십시오..

2- 염료를 제거하고 증류수로 씻는다..

3- 희석 된 Giemsa (1:10) 층을 증류수에 15 분간 놓아 둔다..

4- 염료를 제거하고 증류수로 씻는다..

5 - 건조시키고 현미경으로 관찰한다..

중요 사양

이 기술은 셀 구조의 염료 친화도가 왜곡되지 않도록 시약과 세정액 -7.3 7.2로 조정 한 pH가 필요 예상 최종 색상을 변경하지 않는다.

용도

이 기술은 말초 혈액 및 골수, 조직 절편 및 세포학의 얼룩을 염색하기 위해 임상 실험실에서 사용됩니다.

혈액학 분야에서이 기법은 모양, 크기 및 수의 측면에서 세포의 비정상적인 연구에 매우 중요합니다. 백혈병 및 빈혈과 같은 특정 질병의 진단을 위해 매우 유용한 도구입니다..

또한, 그것은 혈액학 분야에서 기생충을 찾을 때 탁월한 유용성을 제공합니다 (Plasmodium sp 및 Trypanosoma cruzi) 또는 조직 학적 (Leishmanias sp).

질 세포학

질 세포 검사와 관련하여이 기술은 특히 Trichomonas vaginalis. 그 존재는 암종 사진을 시뮬레이트하기 때문에 이것은 중요한 발견입니다 현장에서 기생충이 제거되면 사라집니다..

정자 샘플

그것은 정자의 품질에 대한 귀중한 정보를 제공하기 때문에 정자 샘플 연구에 이상적인 도구였습니다..

제공된 데이터는 주로 숫자 및 형태,뿐만 아니라 존재하고는 생식 세포, 상피 세포, 백혈구와 같은 필수적인있다 수반 셀인.

이 분석으로 머리, 목, 중간 조각 및 주요 조각에있는 정자에서 관찰 된 이상을 설명하는 것이 가능합니다.

또한, 그들은 또한 (정액의 백혈구의 수가 증가) (정액 적혈구의 존재) 및 leucospermia 또는 piospermia 쇼 케이스 haemospermia을 도울 수.

참고 문헌

  1. Costamagna S, Prado M. 진단을위한 새로운 검사, May Grünwald-Giemsa 및 그람 색상 및 배지 검사 Trichomonas vaginalis. 파라 실톨. 2001; 25 (1-2) : 60-64. 구매 가능 지역 : scielo.
  2. Merck KGaA 실험실. 현미경 검사를 위해 Grünwald eosin 메틸렌 블루.
  3. "May-Grünwald-Giemsa 얼룩." 위키 백과, 무료 백과 사전. 2018 년 11 월 15 일 14시 37 분 UTC. 2019 년 1 월 8 일, 04:29 : en.wikipedia.org
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  6. WHO 기준에 따른 Sarabia L. Spermiogram. 해부학 및 생물학 개발 프로그램. 의학부 칠레 대학 구입 가능 : pp.centramerica.com