몫:
Kinyoun 얼룩이는 기초 및 기술
그 킨 이운 염색 이것은 산 - 빠른 박테리아와 산 기생충을 얼룩지게하는 데 사용되는 착색 기술입니다. 그것은 Ziehl-Neelsen의 채색을 수정 한 것에서 태어났습니다. 두 가지 기술은 같은 방식으로 해석되지만 두 가지 요소가 다르다 : 주요 시약의 준비와 Kinyoun 기술이 열을 사용하지 않는다는 점.
이런 이유로 그것은 또한 차가운 변경 Ziehl-Neelsen 또는 Kinyoun 찬 염색으로 알려져 있습니다. 색소 표시 Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, 비정형의 마이코 박테리아, Nocardias sp, 크립토 스포 리듐 파움 (Cryptosporidium parvum), 크립토 스포 리듐 메리어 글리 디스 (Cryptosporidium meleagridis), 크립토 스포 리듐 페리스 (Cryptosporidium felis), 크립토 스포 리듐 무리스 및 Cyclosporas cayetanensis.
Nocardias는 부분적으로 산에 내성을 가진 알콜이기 때문에이 기술로 약하게 얼룩지게한다는 점을 언급 할 가치가 있습니다. 따라서이 장르의 경우 방법론이 수정되었습니다.
차례로, Kinyoun 감기 기술은 콕시듐의 검출을 위해 Didier에 의해 수정 된 trichrome 기술과 결합되었다 (크립토 스포 리듐 파르 밤 전자 이소 스포 라 벨리) 및 미세 세 포자 포자 (Enterocytozoon bieneusi 및 Encephalitozoon intestinalis).
색인
- 1 재단
- 2 기술
- 2.1 자료
- 2.2 Kinyoun fenicated fuchsin의 준비
- 2.3 알코올 - 산의 제조
- 2.4 메틸렌 블루 대조 염료의 제조
- 2.5 킨 이운 얼 기법
- 2.6 Nocardias를위한 특별한 Kinyoun 기술
- Didier에 의해 수정 된 phenolic과 trichromic fuchsin의 결합 된 기술
- 2.8 품질 관리
- 3 Kinyoun 기술 Ziehl 기법에 비해 - Nelsen
- 4 참조
재단
주요 시약 마이코 특정 기생충의 세포벽 밀랍 지질 내에 존재 콜타르 류 리치 (마이 콜린 산)의 결합 특성을 갖는 carbolfuchsin 염색 또는 푹신이며.
그 조합은 산 탈색에 의해 저지되지 않습니다. 따라서, 미생물은 내산성 알코올.
Kinyoun이 단계는이 기술을 준비 푹신 용액 때문에, 필요하지 않은 기술의 열을 통해 염료를 해결 Ziehl-Neelsen 기술 달리 페놀 고농도 포함.
페놀은 carbol fuchsin 염료의 진입을 허용하는 세포벽의 지질 물질을 용해시킵니다. 염료가 침투 한 후, 알코올 - 산으로 세척 함에도 불구하고 고정되어있다..
이 방법으로 내산성 미생물은 특징적인 붉은 색을 띠고 내산성 알코올이 아닌 모든 것은 변색되고 염색됩니다..
기술
재료
- 수정 된 페놀 릭 신.
- 알콜 산.
- 메틸렌 블루.
Kinyoun fenicated 푹신의 준비
- 기본 푹신 : 4 gr.
- 페놀 : 8 ml.
- 알콜 (95 %) : 20 ml.
- 증류수 : 100 ml.
알코올에 함유 된 염기성 푹신은 천천히 용해시켜야합니다. 이어서, 결정화 된 페놀을 56 ℃의 수조에서 용융시켰다. 용해 후, 위에서 준비한 푹신한 용액에 8ml를가한다..
알코올 - 산의 제조
- 진한 염산 : 3 ml.
- 에탄올 (95 %) : 97 ml.
그것은 측정되고 결합되고 혼합되어야합니다.
메틸렌 블루 대조 염료의 제조
- 메틸렌 블루 : 0.3g.
- 증류수 : 100 ml.
그것은 무게가 나가고 녹아있다..
킨 이운 얼 기술
1- 중에서도 객담, 폐 유체 뇨 침전물, 뇌척수액 또는 대변 될 수있는 직접 도말 표본을 제조; 또는 1 차 배양 배지에서 생성 된 순수한 콜로니로부터 수득 된 미생물 현탁액.
2 - 열로 얼룩을 고친다..
3- 착색 가교 위에 도말을하고 준비된 Kinyoun의 페놀 릭 신약으로 덮는다. 3 ~ 5 분 동안 앉게하십시오..
4- 증류수로 씻으시오..
5- 산성 알코올로 3 분간 표백하고 증류수로 다시 씻으십시오.
6 염료가 더 이상 끌리지 않을 때까지 산 알코올로 1 ~ 2 분간 다시 블리치.
7- 증류수로 씻어서 배수구에 놓고 슬라이드를 똑바로 세웁니다..
8- 준비를 메틸렌 블루로 덮고 4 분간 그대로 둔다..
9- 증류수로 씻고 공기를 마르게하십시오..
10 - 40 배에서 100 배 검사.
만약 향상된 가속 및 염색 산 알코올 내성 미생물을 원한다면, 습윤제 한 방울 Kinyoun 푹신 30 또는 40 ㎖ (예 TERGITOL 번호 (7))을 첨가.
일부 실험실은 밝은 녹색 또는 피크닉 산에 대해 메틸렌 블루 대조 염료를 변경합니다. 첫 번째는 초록색을 배경에주고 두 번째는 초록색을 생성합니다.
Nocardias 특별 Kinyoun 기법
Nocardia 박테리아의 염색을 개선하기 위해 Kinyoun 얼룩의 변형이 사용됩니다. 이 기술은 다음과 같습니다.
1- 3 분 동안 Kinyoun fenicated fuchsin으로 얼룩을 가린다..
2 - 증류수로 씻으시오..
3- 염료가 혼입되지 않을 때까지 3 % 준비된 산성 알콜로 간단히 표백.
4 - 증류수로 다시 씻으십시오..
5- 준비물을 메틸렌 블루로 덮고 30 초 동안 그대로 둔다..
6- 증류수로 씻고 공기를 마르게하십시오.
디디에 (Didier)가 수정 한 페놀 성 및 삼색 성의 푹신 (fuchsin) 병용 기술
이 기술은 콕시듐 및 포자를 찾기 위해 대변 샘플을 분석 할 때 권장됩니다. 미크로 스포 륨 sp 동시에 따라야 할 절차는 다음과 같습니다.
1 - 10 분 동안 Kinyoun 페놀 솜씨로 얼룩을 덮어 라..
2- 염료를 제거하고 증류수로 씻는다..
3- 알콜 염산으로 30 초 동안 표백제를 바릅니다..
4 - 증류수로 다시 씻으십시오..
5- 얼룩을 37 ℃에서 30 분 동안 trichrome 용액으로 덮는다..
6- 증류수로 씻으시오..
7- 알코올 아세트산으로 10 초간 탈색.
8- 95 % 에탄올을 사용하여 30 초 동안 닦아 낸다..
품질 관리
양성 대조로서, 도말은 Mycobacterium tuberculosis 준비된 시약으로 염색하여 박테리아가 올바른 색을 띠는지 확인합니다 (적색 - 홍색).
음성 대조군은 내산성 알코올이 아닌 균주로 도말을 준비하여 사용할 수 있으므로 전체 시료가 대조 색상을 가짐을 확인합니다.
Ziehl 기법에 비해 Kinyoun 기법 - Nelsen
이 가열 단계를 제거하기 때문에 Kinyoun 기술은 간단하지만 주요 장점은 매우 독성 및 장기 암의 원인이 증기의 배출을 피할 수 있다는 것입니다. 따라서, Kinyoun 염색은 인체 염색에 더 안전합니다..
부식성이 있고 표백제가 가연성이기 때문에 시약이 피부에 직접 닿지 않도록주의해야합니다..
단점과 관련하여 부정적인 번짐이 반드시 미생물이 존재하지 않는다는 것을 나타내는 것은 아닙니다. 또한 세포 파괴 물질의 존재는 가양 성을 유발하여 진단에 혼동을 일으킬 수 있습니다.
참고 문헌
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