기템 염색 기초, 재료, 기술 및 용도



그 기ema 얼룩 이 산성 및 염기성 염료의 혼합물에 기초하여 임상 샘플의 채색의 유형이다. 그것의 생성은 구스타프 김사, 독일 화학자와 세균, 그는 화합물을 안정화시키기 위해 글리세롤을 추가 완성 Romanowsky에 의해 수행 된 작업에 의해 영감을했다.

Romanowsky의 원래 기법으로 생성 된 변화는 현미경 관찰을 상당히 향상시킬 수 있었기 때문에 기술은 Giemsa stain이라는 이름으로 침례를 받았다..

그것은 매우 기능적이고 경제적 인 간단한 기술이기 때문에 현재 혈액 학적 도말, 골수 샘플 및 조직 절편에 대한 임상 실험실에서 널리 사용됩니다..

Giemsa 염색 기법은 세포 구조의 관찰을 허용하기 때문에 세포학 연구에 매우 유용합니다. 이 기술은 세포질, 핵, nucleoli, 액포 및 세포의 과립을 얼룩지게하고, 염색질의 미세한 흔적을 구별 할 수 있습니다..

또한, 핵의 크기, 모양 또는 착색의 중요한 변화가 검출 될 수 있으며, 핵 - 세포질 관계의 상실을 시각화하는 것이 가능하다.

반면에 골수 및 말초 혈액의 미성숙 세포를 확인하여 백혈병과 같은 심각한 질병을 진단하는 데 중요합니다. hemoparasites, 여분 및 세포 내 박테리아, 곰팡이 등을 검출하는 것도 가능합니다..

세포 유전학에서 그것은 세포의 유사 분열을 연구하는 것이 가능하기 때문에 꽤 사용된다..

색인

  • 1 Giemsa 착색의 기초
  • 2 재료
    • 2.1 모액의 준비를위한 재료
    • 2.2 모액의 준비 모드
    • 2.3 버퍼 용액을 준비하는 물질
    • 2.4 염료의 최종 제조
    • 2.5 착색을 수행하는 데 필요한 추가 자료
  • 3 기술
    • 3.1 염색 공정
  • 4 유틸리티
    • 4.1 혈액학
    • 4.2 균종학
    • 4.3 세균학
    • 4.4 기생충학
    • 4.5 세포학
    • 4.6 세포 유전학
  • 5 Giemsa 얼룩의 효과를 보여주는 연구
  • 6 좋은 염색을위한 권장 사항
  • Giemsa의 색칠에 7 일반적인 실수
    • 7.1 매우 파란색 착색
    • 7.2 과도한 분홍색 착색
    • 7.3 번짐에서 침전물의 존재
    • 7.4 형태학 적 유물의 존재
  • 8 저장 모드
  • 9 참고 문헌

Giemsa 착색의 기초

Romanowsky 형 염료는 염기성 및 산성 염색을 각각 달성하기 위해 산성 염료와 염기성 염료의 대비를 사용합니다. 알 수 있듯이 염기성 염료와 염기성 염료의 친 화성이 있고 그 반대의 경우도 있습니다.

사용 된 염기성 염료는 메틸렌 블루 및 그 산화 된 유도체 (Azure A 및 Azure B)이며, 산성 염료는 에오신.

세포의 산 구조는 핵산, 분열 된 호염기구의 과립이며 다른 것들 중에서도 메틸렌 블루로 염색됩니다.

이 같은 의미에서 세포의 기본 구조는 헤모글로빈과 분열 된 호산구에 포함 된 것과 같은 일부 과립이다. 이것들은 에오신으로 염색 될 것이다..

메틸렌 블루의 푸른 염료가 변색을 특징으로하기 때문에 또한, 그들은 갖는 폴리 음이온의 부하에 따른 가변 색조 다른 구조를 제공 할 수있다.

산성 및 염기성 염료 따라서 전략적 결합은 산 구조의 경우 자주색 및 자주색 하늘색 진한 파란색 색상을, 간격, 각 구조의 생화학 적 특성에 따라, 색상의 넓은 스펙트럼을 개발할 수있다.

eosin이 제공하는 채색이 더 안정적이지만 붉은 오렌지와 연어 사이의 색상을 생성합니다..

재료

모액의 제조를위한 재료

원액의 조제는 500ml의 아세톤이 함유되지 않은 메틸 알콜과 50cc의 중성 글리세린을 측정하여 600mg의 분말 화 된 Giemsa 염료를 필요로한다.

모액의 준비 모드

무거운 Giemsa 분말을 박격포에 넣으십시오. 덩어리가 있으면 흩 뿌려 져야합니다. 이어서 측정 된 글리세린을 상당량 첨가하고 잘 섞는다. 수득 된 혼합물을 매우 깨끗한 호박 병에 붓고.

나머지 글리세린은 모르타르에 넣습니다. 박격포 벽에 붙어 있던 남아있는 염료를 다시 섞어서 같은 병에 붓는다..

병을 덮고 55ºC의 수조에서 2 시간 동안 담가 두십시오. 베인 마리 욕조에서 30 분마다 가볍게 혼합물을 저어 준다..

이어서, 혼합물을 냉각시켜 알코올을 위치시킨다. 이전에는 측정 된 알코올의 일부를 모르타르에 넣고 염료가 남아있는 것을 씻은 다음 나머지 알코올과 함께 혼합물에 첨가합니다.

이 준비는 적어도 2 주 동안 성숙되어야합니다. 어머니 솔루션에 사용되는 부분은 필터링해야합니다..

조제 물의 오염을 피하기 위해, 일정한 사용량이 될 작은 부분을 점 적기와 함께 작은 호박 병에 통과시키는 것이 좋습니다. 시약이 다 떨어질 때마다 충전하십시오..

버퍼 용액을 준비하기위한 재료

한편, pH 7.2의 완충액은 다음과 같이 제조한다 :

인산 나트륨 (무수물) 6.77g을 칭량하고 (NaHPO4), 2.59g의 인산이 수소 칼륨 (KH)2PO4) 및 증류수 1000 cc.

염료의 최종 제조

최종 염색 용액을 준비하기 위해 2cc의 여과 된 원액을 측정하고 6cc의 완충액과 혼합한다. 혼합물을 교반하고.

관련 사실은 염료의 제조 기술이 상업 집에 따라 바뀔 수 있다는 점이다.

착색을 수행하는 데 필요한 추가 자료

물질 설명 게다가, 물 pisetas 착색 다리 있어야하거나 (세탁, 노우즈 또는 커브 글라스 시트 착색 종이 또는 건조 제공 자료를 블로 팅의 시간을 제어하는 ​​타이머를 버퍼 거즈 나면).

기술

염색 공정

1) 채색하기 전에 샘플을 깨끗한 슬라이드에 펼쳐 놓아야합니다..

샘플은 혈액, 골수, 조직 조직 또는 cervico-vaginal 샘플의 절단 일 수 있습니다. 외측은 얇은 것으로 채색하기 전에 1 ~ 2 시간의 건조 시간이 필요합니다..

2) 색칠해야하는 모든 시트는 색상이 지정된 다리에 놓입니다. 항상 같은 순서로 작업하고 각 시트를 잘 식별하십시오..

3) 100 % 메틸 알콜 (메탄올) 방울을 방울 위에 놓고 3 ~ 5 분 동안 그대로 두어 시료를 고정시키고 탈수시킵니다.

4) 시트에있는 메탄올을 버리고 공기 중에서 건조시킵니다.

5) 일단 말린 다음, 전체 시트가 덮일 때까지 최종 염색 액을 점 적기와 함께 놓습니다. 15 분 동안 그대로 두십시오. 일부 저자는 최대 25 분을 권장합니다. 상업 집에 달려있다..

6) 염료를 배수시키고 증류수 또는 7.2 완충 용액.

7) 흡착지 위에서는 시트를 야외에서 건조시키고 지지대의 도움을 받아 수직으로 배열시킨다..

8) 잔여 염료를 제거하기 위해 알코올로 적신 거즈 또는 면봉으로 슬라이드 뒷면을 닦습니다..

유틸리티

Giemsa 염색 기법은 혈액학, 균학, 세균학, 기생충학, 세포학 및 세포 유전학 등 여러 분야에서 사용됩니다..

혈액학

그것은이 얼룩에 주어진 가장 빈번한 유틸리티입니다. 그것으로 우리는 골수 또는 말초 혈액 표본에있는 각 세포를 식별 할 수 있습니다. 백혈구 증이나 백혈구 감소증, 혈소판 감소증 등을 발견 할 수있는 각 시리즈의 수를 추측 할 수있을뿐만 아니라.

그것은 미성숙 한 세포를 식별하기 위해 민감하기 때문에 급성 또는 만성 백혈병의 진단과 관련이 있습니다. 겸상 적혈구 병, 겸상 적혈구 병 등과 같은 빈혈을 진단하는 것도 가능합니다..

균류학

이 영역에서는 검색을 위해이 영역을 사용하는 것이 일반적입니다. Histoplasma capsulatum (세포 내 2 형 곰팡이).

세균학

Giemsa로 물들어있는 혈액 학적 번짐에서, 보리 리아스 sp 발열 재발 (recurrentis)이라고 불리는 질병에 걸린 환자 Spirochetes는 발열 피크에서 채취 한 샘플에서 적혈구 중에서 풍부합니다.

세포 내 박테리아를 다음과 같이 시각화하는 것도 가능합니다. 리케차스 sp 및 클라미디아 트라코마티스 감염된 세포에서.

기생충학

기생충 분야에서 Giemsa 염색은 말라리아, 샤 가스 병 및 리 슈만 편모충과 같은 기생충 질환의 진단을 허용했습니다..

처음 두 기생충에서 Plasmodium sp 그리고 Trypanosoma cruzi 그것들은 감염된 환자의 말초 혈액에서 시각화 될 수 있고, 질병이있는 단계에 따라 다른 단계에서 발견 될 수있다.

혈액 기생충에 대한 검색을 개선하기 위해, May-Grünwald 염료와 혼합 된 Giemsa 염색을 사용하는 것이 좋습니다.

마찬가지로 기생충이 발견 된 Giemsa로 염색 된 피부 생검 샘플을 평가할 때 피부 leishmaniasis를 진단 할 수 있습니다.

세포학

Giemsa 염색은 자궁 경부 세포 샘플의 세포 학적 연구에도 사용되지만,이 목적에 가장 많이 사용되는 기술은 아닙니다.

그러나 Papanicolaou 기술이 제공하는 기능과 비슷한 기능을 저렴한 비용으로 사용하여 리소스가 부족한 경우 사용할 수 있습니다. 그러나 심사관 측의 전문 지식이 필요합니다..

세포 유전학

Giemsa 염색의 관련 특징은 DNA 아데닌과 티민이 풍부한 지역에 강하게 결합 할 수 있다는 것입니다. 이것은 응축의 다른 상태에서 세포의 mitosis 동안 시각화 DNA 수 있습니다.

이 연구는 염색체의 다른 영역의 중복, 삭제 또는 전좌와 같은 색수차를 탐지하는 데 필요합니다..

Giemsa 염색의 효능을 보여주는 연구

Cannova 등 (2016)은 피부 리슈 마니아 증의 진단을 위해 3 가지 착색 기술을 비교했다.

이를 위해, 그들은 실험 동물 (Mesocrisetus auratus) Leishmanias를 실험적으로 접종 한.

저자들은 Giemsa 염색이 Pap-mart® 및 Gaffney 염색보다 우수함을 입증했습니다. 그러므로, 그들은 Giemsa 얼룩이 피부 리슈 매니다증을 진단하는 데 이상적이라고 생각했습니다..

저자에 의해 얻어진 우수한 결과는 김사의 혼합물을 구성하는 염료의 조합에 기인는 명확한 구분 구조를 세포 밖으로 내 모두를 amastigotes 수 있도록 유리한 대비를 생성하는 데 필요한 조건을 제시.

다른 기술 (Pap-mart® 및 Gaffney)도이를 수행했지만 더 약한 방법으로 시각화하기가 더 어려웠습니다. 이것이 Giemsa 얼룩이 leishmaniasis의 기생충 진단에 추천되는 이유입니다.

마찬가지로, Ramírez 등 (1994)의 연구는 결막 도말에서 Giemsa와 Lendrum 얼룩의 유효성을 확인하여 클라미디아 트라코마티스.

저자는 Giemsa와 Ledrum 염색이 동일한 특이성을 가지고 있다고 판단했으나 Giemsa는 더 민감했다.

이것은 현재 Giemsa 염색이 chlamydia 감염의 진단에 가장 빈번하게 사용되는 이유, 특히 자원이 거의없는 경우를 설명합니다.

좋은 염색을위한 권장 사항

시트의 건조는 가속되어서는 안됩니다. 야외에서 건조하기 위해서는 신중한 시간을 기다려야합니다. 약 2 시간.

최상의 결과를 위해 2 시간 후 즉시 색상 표시.

스미어가 더 잘 고정되고 얼룩지게하기 위해 샘플은 얇고 균일 한 층이 남아있는 방식으로 쉬트 상에 분포되어야합니다.

선호되는 혈액 샘플은 모세 혈관입니다. 왜냐하면 스미어는 혈액 방울에서 직접 만들어지기 때문에 샘플에는 첨가제가 없으므로 세포 구조의 유지를 선호합니다.

그러나 정맥혈이 사용된다면 EDTA는 헤파린이 아닌 항응고제로 사용되어야한다. 왜냐하면 후자는 일반적으로 세포를 변형시키기 때문이다.

Giemsa의 색칠에 흔히있는 실수

이 색칠의 실습에서 실수가있을 수 있습니다. 그들은 구조의 그늘의 급격한 변화에 의해 입증됩니다..

매우 파란색 착색

그 원인은 다음과 같습니다.

  • 매우 두꺼운 얼룩
  • 착색 시간 초과
  • 너무 적은 세척.
  • 중성 pH (알칼리성)보다 훨씬 높은 시약의 사용.

이러한 조건에서 다음과 같은 구조의 색상은 다소 염색 핑크 연어 이상의 적혈구가 녹색으로 될 수 있도록, 푸른 빛이 도는 회색 벽돌을 염색한다 호산구의 과립은 의지에 너무 켜고 것, 왜곡 일반적인 음조의 편차.

과도한 분홍색 착색

그 원인은 다음과 같습니다.

  • 불투명 한 염색 시간.
  • 장시간 또는 과도한 세탁.
  • 불량 건조.
  • 매우 산성 시약의 사용.

이 특별한 경우에, 일반적으로 파란색으로 물들어있는 구조는 거의 보이지 않을 것이며, 핑크색으로 물들어있는 구조는 매우 과장된 색조를 가질 것입니다.

예 : 적혈구가 강한 밝은 빨간색이나 주황색을, 핵 염색질 분홍색 창백하고 호산구의 과립은 강렬한 빨간색 밝은 염색.

스미어에서 침전물의 존재

원인은 다음과 같습니다.

  • 더럽거나 잘 씻겨지지 않은 시트 사용.
  • 얼룩이 건조하게하지 마십시오..
  • 너무 오래 고정액을 그대로 두십시오..
  • 얼룩이 끝날 때 부적절한 세척.
  • 부적절한 여과 또는 사용 된 염료의 비 여과.

형태 학적 유물의 존재

형태 학적 인공물이 얼룩에 나타날 수 있으므로 존재하는 구조물을 시각화하고 해석하기가 어렵습니다. 이는 다음에 기인합니다 :

  • 헤파린과 같은 사용 된 항응고제의 유형.
  • 더럽거나 손상되거나 기름기가 많은 시트 사용.

저장 모드

준비가 끝나면 염료는 실온 (15 - 25 ° C)에서 염료가 침전되는 것을 방지하기 위해 보관해야합니다. 닫힌 호박색 용기에 보관해야합니다..

참고 문헌

  1. Cannova D, Brito E 및 Simons M. 피부 리슈 마니아 증의 진단을위한 착색 기술 평가. 살루스.  2016; 20 (2) : 24-29.
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  3. Clark G. 염색 절차 (1981), 4면. 윌리엄스 & 윌킨스.
  4. 응용 임상 화학 진단을위한 Giemsa 염료 시험관 내. 배급 자 : cromakit.es
  5. Ramírez I, Mejía M, García de la Riva J, Hermes F와 Grazioso C. Giemsa와 Lendrum의 유효성은 결막 얼룩에서 동정되어 클라미디아 트라코마티스. Sanit Panam의 볼. 1994; 116 (3) : 212-216.
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  7. "Giemsa 얼룩." 위키 백과, 무료 백과 사전. 2017 년 9 월 1 일, 01:02 UTC. 2018 년 12 월 6 일, en.wikipedia.org.