포자 얼룩 기초, 기술 및 사용



그 포자 염색 불리한 조건에있을 때 일부 박테리아 속을 형성하는 저항 구조를 채색하는 데 사용되는 방법론입니다. 이러한 구조들은 생존의 길에 해당한다..

포자를 형성하는 많은 속 (genera)이있다. 그러나, 주요 것들은 Bacillus와 Clostridium이다. 이 속은 인간에 대한 병원성 종을 가지고 있기 때문에 더 관련이 있다고 간주됩니다.

각 바실러스는 포자를 일으킬 수 있습니다. 준비를 염색 할 때, 포자는 바실러스 (endospore) 내부 또는 외부 (exospore)에서 발견 될 수 있습니다. 그람 염색과 같은 박테리아에 대한 기존의 염색 기술로 포자는 무색으로 유지됩니다.

현재, 염색하기 위해 포자의 두꺼운 구조를 교차시킬 수있는 몇 가지 착색 방법이 있습니다. 이러한 방법론은 매우 다양합니다. 이 중 우리는 Dorner 기술, Möeller 얼룩 및 Wirtz-Conklin이라고도 알려진 Shaeffer-Fulton 방법론을 언급 할 수 있습니다..

언급 된 모든 기술 중 Shaeffer-Fulton 방법론은 일상 실험실에서 가장 많이 사용됩니다. 그것은 1930 년에 채색을 만든 두 명의 미생물 학자 인 Alicia Shaeffer와 MacDonald Fulton에게 그 이름을 썼습니다. 그러나 때때로이 기술은 1900 년대의 두 세균 학자를 기리기 위해 Wirtz-Conklin이라고 불립니다.

색인

  • 1 재단
  • 2 포자 착색 기술
    • 2.1 도너의 기술
    • 2.2 수정 된 도너 기술
    • 2.3 Shaeffer-Fulton 또는 Wirtz-Conklin의 기법
    • 2.4 eller러 기술
    • 2.5 열이없는 Modified Möeller technique
  • 3 용도
    • 3.1 예제
  • 4 참고

재단

포자는 매우 두꺼운 벽을 가지고 있기 때문에 전통적인 착색으로 얼룩지지 않습니다. 포자의 복잡한 구성은 대부분의 염료가 들어 가지 않도록합니다..

다음 층 공부 외측 포자는 관찰되는 경우 제 당 단백질에 의해 형성되는 얇은 외층 인 exosporium이고,.

그런 다음 고열에 저항성을 갖는 큐티클이 나오고 펩티도 글리 칸으로 구성된 피질이 뒤 따른다. 그런 다음 원형 벽을 보호하는 벽의 벽이 있습니다..

포자는 15 % 칼슘과 dipicolinic 산을 포함하는 탈수 구조입니다. 따라서, 대부분의 포자 착색 기술은 염료가 두꺼운 구조를 관통 할 수 있도록 열의 적용을 기반으로합니다.

포자가 염색되면 염료를 제거 할 수 없습니다. Shaeffer-Fulton 기법에서 말라카이트 그린은 식물 세포로 들어가고 열을 가하면 말초 포자와 엑손 포어를 침투한다.

물로 씻어 내면 염료가 식물 세포에서 제거됩니다. 이것은 녹색 말라 카이트 염료가 약간 염기성이기 때문에 생기기 때문에 식물 세포에 약하게 결합합니다.

반면에, 그것은 포자에서 빠져 나올 수 없으며 마침내 safranin을 가진 바실러스는 대조적입니다. 이 기초는 비슷한 기술이 적용되는 나머지 기술에도 유효합니다..

포자 착색 기술

포자를 얼룩지게하려면 연구하고자하는 용의주의 순수한 문화가 있어야합니다..

배양 물은 24 시간 동안 극한의 온도에 노출되어 미생물이 포자충을 형성하도록 자극합니다. 이를 위해 44 ° C의 오븐 또는 8 ° C의 냉장고에 24 시간 또는 48 시간 동안 배양 할 수 있습니다.

언급 된 온도에서 너무 많은 시간이 남겨지면 모든 포자충이 바실러스를 떠날 것이기 때문에 외래 포자 만 관찰됩니다.

마지막에 멸균 생리 학적 솔루션 몇 방울 깨끗한 슬라이드에 배치해야합니다. 다음 작물의 작은 부분은 가지고 가고 정밀한 퍼짐은한다. 

그 후에 그것은 건조하게 남겨지고, 그것은 열에 고정되어 있으며 아래에 설명 된 몇 가지 기술로 얼룩지게됩니다.

도너의 기술

시험관에서 증류수에 포자가 된 미생물의 농축 된 현탁액을 준비하고 동량의 여과 된 Kinyoun 페놀 릭 신.

2 - 튜브를 끓는 물이 담긴 욕조에 5 ~ 10 분간 놓아 둔다..

3- 깨끗한 슬라이드에서 한 방울의 이전 현탁액을 10 % 니그로 신 수용액 한 방울과 섞고 끓여서 여과합니다.

4 온화한 열로 신속하게 연장하고 말린다..

5- 100X objective (immersion)으로 검사하십시오..

포자가 빨간색으로 얼룩이지며 박테리아 세포가 진한 회색 배경에 거의 무색으로 나타납니다..

수정 된 도너 기술

1 - 포자 된 미생물의 현탁액을 슬라이드에 뿌리고 열에 고정시킨다..

2- 샘플은 fenic acid fuchsin이 첨가 된 여과지로 덮여있다. 분출 물이 분출 될 때까지 분젠 버너의 불꽃으로 5 ~ 7 분 동안 염료를 가열합니다. 그런 다음 용지가 제거됩니다..

3- 물로 씻은 후 흡수성 종이로 말린다..

4 - 니그로 신 또는 바늘을 펼치기 위해 두 번째 슬라이드를 사용하여 10 % 니그로 신의 얇은 필름으로 도말을 덮습니다..

포자 및 박테리아에 의해 취해진 채색은 종래 기술에서 기술 된 것과 동일하다.

Shaeffer-Fulton 또는 Wirtz-Conklin 기술

1 - 슬라이드에 포자 성 미생물 현탁액을 얇게 발라서 열에 고착시킨다..

2 - 말라카이트 그린 5 % 수용액으로 슬라이드를 덮으십시오 (여과지를 시트에 놓을 수 있음).

3- 분젠 버너의 불꽃을 가열하여 증기가 빠져 나와 불꽃을 제거하도록하십시오. 6 ~ 10 분 동안 조작을 반복하십시오. 절차 중에 공작석 녹색 용액이 너무 많이 증발하면 더 많은 양을 추가 할 수 있습니다.

4- 여과지를 꺼내고 물로 씻으십시오..

0.5 % 수성 safranin으로 30 초 동안 슬라이드를 덮으십시오 (0.1 % 수성 사큐 라닌을 사용하고 3 분 동안 그대로 두십시오).

이 기술로 포자는 녹색이고 바실러스는 적색입니다.

젊은 문화의 내부 포자충은 극도로 투명하거나 무색이기 때문에 잘 자라지 않는다는 단점이 있습니다. 이것을 피하기 위해 배양 48 시간 배양액을 사용하는 것이 좋습니다.

뫼엘 기술

1- 스미어를 클로로포름으로 2 분 동안 덮는다..

2- 클로로포름을 버린다..

5 분 동안 5 % 크롬산으로 덮는다..

4- 증류수로 씻으시오.

5- 시트는 푹신 - 페놀 릭 잉어로 덮여 있으며 증기가 방출 될 때까지 분젠 버너의 불꽃에 노출됩니다. 그때 그것은 잠시 동안 불꽃에서 제거됩니다. 10 분이 될 때까지 작업을 반복합니다..

6- 물로 씻으십시오..

7- 산성화 된 에탄올 (염산 알코올)을 사용하여 탈색시킨다. 20 초 또는 30 초 동안 방치됩니다..

8- 증류수로 씻으십시오..

9- 시트를 5 분 동안 메틸렌 블루로 덮음.

10- 증류수로 씻으시오..

11- 건조시키고 샘플을 현미경으로 찍는다..

포자는 적색과 청색 간균으로 보입니다. 독성이 있기 때문에 증기를 흡입하지 않는 것이 중요하며 장기적으로는 발암 성일 수 있습니다.

열이없는 수정 된 Möeller 기술

2007 년 Hayama와 그의 공동 작업자는 Möeller 기법을 수정했습니다. 이들은 염료를 가열하는 단계를 제거하고, 계면 활성제 용액 TERGITOL carbol의 푹신 carbol-7 10 mL 당 2 방울을 첨가하여 대체. 같은 결과가 얻어졌다..

용도

간균과 식물 세포를 변형 여부를 할 수있는 능력 내에서 같은 모양의 존재, 위치하기 때문에, 포자를 병원균 식별 정보에 대한 매우 가치 있고 유용한를 제공 컬러링, 종에 안내 할 수있는 데이터는 특정성에 관련된.

이러한 맥락에서 볼 때, 포자는 둥글거나 타원형이 될 수 있으며, 중심에 위치 할 수도 있고, 또는 중심부, 말단부 또는 말단에 위치 할 수도 있습니다.

예제들

- 클로스 트리 디움 디피 실 바실러스를 변형시키는 말단 위치에 타원형 포자를 형성 함..

- 포자의 클로스 트리 디움 삼중 그것은 타원형이며, 바실러스를 변형시키지 않고 터미널 레벨에 위치한다..

- 내생 포자충 클로스 트리 디움 테타 니 그것은 종말이며 바실러스를 변형 시켜서 북의 모양을 낸다..

- 포자의 Clostridium botulinum, C. 조직 내피, C. 참정한 및 C. 패혈증 그들은 둥글거나 말미의 타원형이며 바실러스를 변형시킨다..

- 내생 포자충 클로스 트리 디움 소델 리 그것은 약간의 변형과 함께 중앙 위치에 위치한다..

참고 문헌

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