몫:
Tetrathionate 국물 기초, 준비 및 사용
그 사육 액 또는 TT 육즙은 살모넬라 균주의 농축 및 회수를위한 선택적인 액체 배양 배지이다. 그것은 Müeller에 의해 만들어졌고 나중에 Kauffmann에 의해 수정 되었기 때문에 Müeller-Kauffmann broth라고 부르는 사람들이 있습니다.
원래의 배지에는 proteose peptones, calcium carbonate 및 sodium thiosulfate가 들어있었습니다. 카우프만 (Kauffmann)은 담즙 염을 첨가하여 밝은 녹색으로 다른 양식을 만들었습니다. 이러한 물질은 대장균의 성장을 억제하여 병원성 박테리아의 발달에 유리한 매개체를 남긴다.이 경우 살모넬라 균이다..
수정은 매체의 감도를 상당히 증가 시켰기 때문에 매우 성공적이었습니다. 그러므로 현재 살모넬라 균을 모든 유형의 샘플에서 검색 할 수 있지만 특히 고체 또는 액체의 대변 및 식품에 유용합니다..
그것의 준비는 두 단계로 이루어져 있습니다. 상업용 매질은 테트라 티오 네이트 브로스를 제조하기위한 염기이고,이어서 테트라 티오 네이트를 형성하기 위해 요오드화 된 요오드 용액을 첨가하여 매질을 완성시킨다.
미국 공중 보건 협회 (APHA)는 밝은 녹색으로 보충 된 tethionate 국물을 살모넬라 검색을 위해 농축하는데 사용하는 것을 권장한다. 왜냐하면 그것은 살균제 국물과 셀레 나이트 수프보다 더 선택 적이기 때문이다..
일반적으로 살균제 인 살모넬라 균이 소량으로 의심되거나 억제 물질에 노출되거나 생존력을 최소화하는 산업 공정에 의해 남용되는 경우에 테트라 티오 네이트 매 국물이 이상적입니다.
색인
- 1 재단
- 2 준비
- 2.1 - Tetrathionate
- 2.2 - 밝은 녹색의 버리 테인 테트라 티오 네이트 수프
- 3 사용
- 4 품질 관리
- 5 권장 사항
- 6 참고 문헌
재단
현재의 펩톤은 카제인 췌장 소화 및 동물 조직의 소화 소화에 해당한다. 이것들은 일반적으로 박테리아 성장을위한 탄소, 질소 및 영양소의 공급원을 제공합니다.
그 부분을 위해, 티오 황산나트륨은 요오드화 된 용액과 반응하여 테트라 티오 네이트를 형성한다. 이것은 대장균 군의 성장을 억제하고 효소 테트라 티오 네이트 환원 효소를 포함하는 박테리아의 개발을 촉진하며, 그 중에서도 살모넬라 균뿐만 아니라 프로 테우스.
담즙 염은 또한 대부분의 그람 양성균 및 일부 그람 음성 박테리아 (대장균 군)의 억제 물질로 작용하며,.
탄산 칼슘은 황산을 형성하는 테트라 티오 네이트의 분해로 생성 된 독성 물질을 흡수합니다. 이러한 의미에서, 탄산 칼슘은 안정한 배지의 pH를 유지하면서 산도를 중화시킨다.
밝은 녹색 양식의 경우,이 물질은 살모넬라 (Salmonella) 속 이외의 다른 미생물을 억제함으로써 테트라 티오 네이트 (tetrathionate) 육즙의 선택력을 증가시킵니다..
준비
-수화 물
요오드 요오드 용액
무게 :
- 요오드 6gr.
- 요오드화 칼륨 5gr.
요오드화 칼륨을 약 5 ml의 멸균 증류수에 녹인 다음, 혼합물을 가열하면서 요오드를 조금씩 첨가한다. 완전히 용해시킨 후 멸균 증류수로 최종 부피 20ml가 될 때까지 채운다..
테트라 티오 네이트 수프의 절반 염기
탈수 된 배지 46g을 멸균 증류수 1L에 현탁하십시오. 완전히 녹을 때까지 혼합하고 가열하십시오. 단 몇 분간 끓일 수 있습니다. 오토 클레이브에서 멸균하지 마십시오. 배지의 염기를 약 45 ℃로 냉각시키고, 이때 20 ㎖의 요오드화 된 용액을 첨가한다..
즉시 요오드 라다 용액을 첨가 한 후 사용하십시오. 혼합물 전체를 사용하지 않으려면 다음과 같이하십시오.
10ml의 기본 배지를 튜브에 넣고 시료를 접종 할 때 요오드화 된 용액 0.2ml만을가한다..
사용하지 않을 것은 여전히 냉장고에 보관할 수 있지만, 멸균되지 않은 매체이므로 이상적인 양은 필요한 양을 준비하는 것입니다..
요오드화 요오드 용액을 첨가하기 전의 매질의 색은 유백색이며 백색 침전이 있고 첨가 한 후에는 진한 침전물을 갖는 갈색이다. 관찰 된 침전물은 정상이며 용해하지 않는 탄산 칼슘에 해당합니다. 배지의 최종 pH는 8.4 ± 0.2이다..
-밝은 녹색의 Tetrathionate 국물 변형
밝은 녹색으로 테트라 티오 네이트 브로스를 제조하기 위해 상기 한 모든 단계를 수행하지만 0.1 %로 준비된 밝은 녹색 용액 10ml를 혼합물에 첨가한다..
밝은 녹색
이 솔루션은 다음과 같이 준비됩니다.
밝은 녹색의 0.1 g을 달아 증류수 100 ml에 현탁한다. 전체 용해를 달성하기 위해 끓일 때까지 가열하십시오. 앰버 병 저장.
사용
대변 샘플 (대변 배양)의 프로토콜은 다음과 같습니다.
1 g의 고형 대변 또는 1 ml의 액체 대변을 10 ml의 즉시 사용할 수있는 테트라 티오 네이트 브로스가 든 튜브에 접종하십시오. 활기차게 흔들어 43 ° C에서 6-24 시간 동안 고생물에 품어 라..
그런 다음 브로 쓰 10 ~ 20 μl를 취하여 SS 한천, XLD 한천, 밝은 녹색 한천, 헤 코엔 장 한천 등과 같은 살모넬라 균에 대해 선택적으로 배양합니다..
병행하여 Salmonella의 선택 배지에는 농축없이 직접 시료 (대변)를 접종해야합니다. 직장 면봉 샘플의 경우, 튜브에 수집 된 물질을 다운로드하고 위에서 설명한대로 진행하십시오.
식품 시료의 경우 고체 식품 10g 또는 액체 식품 10ml를 칭량하고 즉시 사용할 수있는 테트라 티 오 네이트 (tetrathionate) 국물 100ml를 병에 접종하십시오. 위에서 설명한 것과 같은 방법으로 진행하지만 37 ° C.
알 수 있듯이 샘플과 국물의 관계는 항상 1:10입니다..
품질 관리
배양 배지를 시험하기 위해, 공지 된 대조 균주가 사용될 수있다. 가장 일반적으로 사용되는 ATCC 인증 균주.
사용되는 균주는 살모넬라 티피 무리 움 ATCC 14028, 살모넬라 균류 DSM 4224, 살모넬라 장염 균 ATCC 13076, 대장균 ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 및 포도상 구균 (Staphylococcus aureus) ATCC 25923.
살모넬라 균주의 경우 우수한 발달이 기대되는 반면, 대장균 약하거나 규칙적인 발달을 보일 수 있으며, 그람 양성 균주 (Enterococcus and Staphylococcus)는 부분적으로 또는 완전히 저해된다.
권장 사항
-이 배지는 프로 테우스의 성장을 억제하지 않기 때문에 일부 실험실에서는이 미생물 균주의 발생을 막기 위해 40 mg / L의 노보비신을 사용합니다. 요오드화 요오드 용액 전에 항생제를 첨가해야합니다.
-요오드화 요오드 용액을 포함한 배지를 조제한 후 접종 후 2 시간 이상 경과하면 안된다..
-튜브 내에서 배지를 분배하는 순간에, 혼합물은 형성된 침전물을 재현 탁하기 위해 연속적으로 균질화되어야한다.
-덜 오염 된 시료에서 tetrathionate broth는 35 ~ 37 ℃에서 배양하고, 오염이 심한 시료에서는 43 ℃에서 배양하는 것이 좋습니다..
참고 문헌
- Conda Pronadisa 실험실. Müeller-Kauffmann에 따르면 tetrathionate 국물 기지. 구매 가능 지역 :
- BD 실험실 Tetrathionate Broth Base. 구매 가능 지역 :
- 영국 실험실. Tethionate broth base. 구매 가능 지역 :
- 미디어 BBL. 살모넬라 균 재배를위한 관 준비.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
- 37 ° C, 42 ° C에서 배양 모두 플로레스 Abuxapqui-J, PUC 프랑코 M, 헤레 Navarrete은-M, 거실 ROSEL M, 프랑코 Monsreal J. 비교 배지 소디움 셀레 나이트 및 나트륨 테트라 티오 네이트, 절연 살모넬라 균 운반 대. Rev Biomed 2003; 14 (4) : 215-220