몫:
우레아 수프 기초, 준비 및 사용
그 우레아 수프 특정 미생물에서 효소 우레아제의 존재를 입증하는 데 사용되는 액체 배양액입니다. 우레아제는 구성 적으로 생산되는 미생물 효소이며, 즉 작용하는 기질이 존재하는지 여부에 관계없이 독립적으로 합성됩니다.
우레아제의 기능은 유기 화합물의 분해와 관련이 있습니다. 모든 미생물이이 효소를 합성 할 수있는 것은 아니므로 실험실에서의 결정은 특정 박테리아 균주를 확인하고 동일한 종의 종을 구별 할 수 있습니다..
우레아 검사에는 스튜어트 (Stuart)와 크리스텐센 (Christensen)의 두 가지 유형이 있습니다. 그들은 구성과 감도가 다릅니다. 첫 번째는 Proteus 속의 종에 의해 생성 된 다량의 우레아제를 보여주는 것이 특별하다..
두 번째는 더 민감하고 뒤늦게 예컨대 간균, 엔테로 박터, 포도 구균, 브루셀라, 보르 데 텔라, 바실러스, 마이크로 코커스 및 헬리코박터 코박 테 리움 속 등의 다른 세균에 의해 생성 우레아제 소량 검출 할.
스튜어트 브로스 우레아는 우레아, 나트륨, 염화 칼륨, 인산, 인산 일 칼륨, 효모 추출물, 페놀 레드 및 증류수를 포함.
발효액 또는 크리의 우레아 한천 펩톤, 염화나트륨, 인산 일 칼륨, 글루코스, 우레아, 페놀 레드, 증류수로 구성되어 있지만 한천. 후자는 단단한 매체 인 경우에만.
색인
- 1 재단
- 1.1 스튜어트 우레아 수프
- 1.2 Christensen 육수 또는 한천 요소
- 1.3 두 매체의 해석 (Stuart and Christensen)
- 2 준비
- 2.1 스튜어트 우레아 수프
- 2.2 Christensen 배지 또는 한천 요소
- 3 용도
- 4 요소 시험 파종
- 5 품질 관리
- 6 참고 문헌
재단
효소 우레아제는 우레아를 가수 분해하여 이산화탄소, 물 및 암모니아 2 분자를 형성합니다. 이들 화합물은 반응하여 탄산 암모늄이라고하는 최종 생성물을 형성한다.
스튜어트 우레아 수프
스튜어트 우레아 수프는 pH 6.8로 완충되었습니다. 따라서, 미생물은 적색을 페놀로 전환시키기 위해 다량의 암모늄을 형성 할 수 있어야한다. pH가 8 이상으로 높아야합니다..
따라서 우레아 배지는 배양 24 내지 48 시간에 긍정적 인 결과를 산출 스튜어트 테우스에 대해 선택하고, 우레아제 낮은 수량을 생산하거나 천천히 우레아 가수 분해 세균 효과적이지.
이것은 프로테우스 종 (Proteus species)이 질소원으로 우레아를 사용할 수 있기 때문입니다. 대조적으로, 다른 우레아제 생산 박테리아는 추가 원천이 필요합니다.
그러나, Pérez et al. (2002)는 요소 국물 스튜어트는 장군의 효모 칸디다, 크립토, Rhodotorula, 포론 및 사카로 마이 세스의 분해 효소를 결정하는 크리스텐슨의 요소 한천로 효율적이라고 결정.
이 연구의 저자는 24 시간 및 48 시간 동안 배양하여 두 미디어 (스튜어트 및 크리스텐센)와 100 % 일치를 달성했다고 주장합니다. 그들이 미디어를 강한 분홍색 - 밝은 색으로 바꿀 수 있었던 긴장감을 긍정적으로 취했다는 조건하에.
이 설명은 Lodder (1970)은 거의 모든 효모는 옅은 분홍색을 크리스텐슨의 요소 한천의 베젤을 달성했다고 주장하기 때문에 필요하다. 그들은 최소한의 양으로 우레아, 표면의 아미노산의 산화 적 탈 카르 복 실화에 의한 아민의 형성을 가수 분해 할 수 있기 때문이다. 이것은 긍정적 인 것으로 해석 될 수 없다.
Christensen에서 얻은 배양액 또는 요소 한천
Christensen 우레아 브로 쓰나 한천은 적은 양의 암모늄을 검출 할 수있어 완충 효과가 떨어집니다. 또한이 배지는 펩톤과 포도당으로 풍부합니다. 이들 화합물은 스튜어트 (Stuart) 육즙에서 자라지 않는 다른 우레아제 생성 미생물을 발생시킨다..
마찬가지로 Christensen 요소 테스트는 특히 Proteus의 경우보다 빠른 결과를 제공하며 최소 시간으로 30 분, 최대 시간으로 최대 6 시간 동안 강하게 긍정적 인 반응을 나타낼 수 있습니다.
우레아제 - 생산 미생물의 나머지 컬러 반 5 또는 6 일 후 약한 반응을 줄 수 약간 후 6 시간 강하게 24, 48, 72 시간 이상, 심지어 몇몇 균주를 반전 달성.
두 매체의 해석 (Stuart and Christensen)
매체는 원래 황색 주황색이며 긍정적 인 반응은 매체의 색을 핑크색 자홍색으로 바꿀 것입니다. 색상의 강도는 암모늄의 양에 직접 비례합니다..
음의 반응은 크리스텐슨의 요소 한천 배지와 옅은 분홍색을 줄 수있는 효모를 제외하고 원래의 색상을 통해 떠나.
준비
스튜어트 우레아 수프
상업 집의 표시에 따라 필요한 그램의 무게를 잰다. 가급적 멸균 증류수에 용해시킨다. 우레아는 열에 민감하므로 열을 사용하지 마십시오..
막 여과법은 살균하는데 사용됩니다. 이를 위해, 직경 0.45μ의 구멍이있는 Millipore 필터가 사용됩니다. 고압솥을 사용하지 마십시오. 용액을 여과하면 멸균 튜브에 분산됩니다. 신뢰할 수있는 결과를 얻으려면 튜브 당 최대 양으로 최소량을 1.5ml에서 3ml로 변경해야합니다..
사용하기 전에 냉장고에 보관하고 숙성하십시오..
여과 방법을 사용할 수없는 경우, 매체를 즉시 사용하여 신뢰할 수있는 결과를 얻으십시오.
우레아 스튜어트 (Stuart) 수프를 준비하는 또 다른 방법은 다음과 같습니다 :
일부 상업용 주택은 우레아를 포함하지 않고 요소 테스트의 절반 기준을 판매합니다.
상업적으로 나타낸 양을 칭량. 또한 증류수에 용해되고 15 분 동안 121 ℃에서 멸균. 작은 스탠드하자 매체가 여전히 따뜻한 경우 100 ㎖을 여과 멸균 20 %로 제조 된 우레아 수용액에 첨가.
이전에 설명한대로 멸균 튜브에 분포되어 있습니다..
Christensen에서 얻은 배양액 또는 요소 한천
-요소 용액의 제조
탈수 된 요소 29g을 칭량하고 증류수 100ml에 녹입니다. 여과 방법을 사용하여 살균하십시오. 오토 클레이브를하지 마십시오..
-우레아 한천
탈수 한천 한천 24g을 증류수 950ml에 녹인다. 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 소독하십시오. 그것이 50 ° C의 온도에 도달 할 때까지 기다린 다음 미리 준비된 요소를 무균 적으로 첨가하십시오.
멸균 튜브에 4 ~ 5 ML을 붓고 고형 때까지 기울이십시오. 긴 플루트 피크가 있어야합니다..
이 매질은 또한 액체 형태로 제조 될 수있다.
용도
요소의 증명 테우스가 제공하는 빠른 응답 주어, 가족 장내 세균의 다른 장군에서 테우스를 구분하는 것이 매우 효과적이다.
Christensen의 조성을 사용하면 동일한 속의 종을 구별하는 데 도움이됩니다. 예를 들어, S. haemolyticus 및 S. warneri s~에 포도상 구균 응고 효소 음성 및 용혈성, 그러나 그것들은 다르다. S. haemolyticus 그것은 부정적인 우레아이고 S. warneri 양성 우레아.
다른 한편, McNulty는 2 %의 Christensen 요소를 사용하여 헬리코박터 파일로리 위 점막 (antral region)에서 채취 한 생검 샘플에서,.
존재감 H. pylori 양성 우레아 검사로 입증됩니다. 결과를 관찰하는 기간은 존재하는 미생물의 양에 정비례합니다.
보시다시피, 그것은 진단을위한 간단한 방법입니다 헬리코박터 파일로리 위 생검.
마지막으로,이 테스트는 속 브루셀라, 보르 데 텔라, 바실러스, 마이크로 코커스 및 마이코 박테리아의 차별화 종에 유용.
요소 시험 파종
두 가지 방법은 결과를 최적화하기 위해 강력한 미생물 접종을 필요로합니다. 박테리아 식민지는 혈액 한천과 사부 라우 한천 효모에서 추출하는 것이 바람직하지만 일부 예외는 있습니다. 접종 물은 액체 배지.
37 ℃에서 24 시간에서 48 시간 동안 배양 한 Stuart urea broth의 경우, 균주가 박테리아 일 때 단지 Proteus 속 균주를 찾고 있음을 알고 있음. 효모의 경우 37 ° C 또는 24 시간에서 48 시간 동안 배양 할 수 있습니다.
Christensen urea broth의 경우, 37 ° C에서 24 시간 동안 품어 둔다. 검사 결과가 음성 인 경우 최대 6 일 동안 배양 할 수 있습니다. 6 시간이 경과하기 전에 검사가 양성이면 Proteus 속의 변종임을 나타냅니다..
Christensen 우레아 한천의 경우 천천히 한천의 빗속에 구멍을내어 접종하지 않습니다. 국물도 동일한 방식으로 배양되고 해석됩니다..
품질 관리
대조 균주를 이용하여 배지를 시험 할 수있다. 프로 테우스 미라 빌리스 ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, 대장균 ATCC 25922 및 살모넬라 티피 무리 움. 처음 두 가지는 긍정적 결과를 가져와야하고 마지막 두 개의 부정 결과가 있어야합니다..
참고 문헌
- Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, 콜레라 M, 레이즈 H. 외. 효모의 진단에서의 테스트로서 우레아제 시험을위한 스튜어트 우레아 브로스의 사용. Soc. Ven. Rev. Microbiol. 2002; 22 (2) : 136-140. 구입처 : Scielo.org.
- Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 세균의 동정을위한 생화학 적 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스 아르헨티나.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 학적 진단. 5th ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
- 영국 실험실. Christensen Medio (우레아 한천 기초) 2015. 이용 가능 : britanialab.com