몫:
펩톤 물 기초, 준비 및 사용
그 펩 토나 다 물 그것은 주로 비 선택적 액체 농축 배지로서 식품 시료 나 다른 물질의 희석제로 주로 사용됩니다. 이것은보기의 화학적 인 관점에서 아주 간단하고, 고기, 염화나트륨과 물의 peptone을 포함 의미.
그것은 특정 영양가를 가지고있어 샘플을 풍성하게합니다. 박테리아가 박살난 경우이 수단은 생존력을 회복 할 수있는 힘이 있습니다. 장내 세균과 속하는 세균의 회수에 특히 유용합니다.
살모넬라 (Salmonellas)의 경우, 완충 된 펩 토나 다 (peptonada) 물을 사용하는 것이 좋습니다. 이것은 시료의 사전 농축 수단으로 사용되며,이 경우에는 인산이 나트륨 및 인산이 칼륨과 같은 다른 원소가 포함되어 있습니다.
일반적으로 peptonada 물은 중성 pH에서 준비되지만 pH가 8.5 ± 0.2 (알카라인) 일 필요가있는 다른 변종이 있습니다. 분리 할 박테리아는 알칼리성이기 때문에 예를 들어 비브리오 콜레라.
한편,이 배지는 탄수화물 발효 시험의 기본 배지로 사용할 수 있습니다.
색인
- 1 재단
- 2 준비
- 2.1 가정 준비 (비영리)
- 2.2 상업적인 매체를 사용하여 준비
- 2.3 발효 시험 준비
- 2.4 peptonada 물의 다른 이체
- 3 사용
- 3.1 의자 샘플
- 3.2 음식 견본
- 4 품질 관리
- 5 제한 사항
- 6 참고 문헌
재단
펩톤은 세균 발달에 필요한 영양소, 특히 질소와 단쇄 아미노산을 제공하며 염화나트륨은 삼투압 균형을 유지합니다.
또한이 배지는 산업 공정에 의해 손상된 세균 세포를 분산, 균질화 및 수리 할 수 있습니다..
희석제로서 이상적으로, 생리 학적 용액 (SSF) 또는 인산염 완충액 (PBS)을 효과적으로 대체하며,.
박테리아 성장은 탁도를 관찰함으로써 분명합니다.
준비
수제 준비 (비상업적 인)
펩톤 1g과 염화나트륨 8.5g을 달아 증류수 1L에 녹인다. pH는 7.0으로 조정해야합니다. 이를 위해 1 N 염화 나트륨.
상업적 매체를 이용한 준비
탈수 된 매질 15g을 계량하여 증류수 1L에 녹입니다. 혼합물을 균질화하십시오. 필요한 경우 혼합물을 1 분간 끓여 전체 용해를 돕습니다. 필요에 따라 100ml 튜브 또는 10ml 튜브에 담아주십시오. 121 ℃에서 15 분간 오토 클레이브한다..
차갑게 사용하고 냉장고에 보관하십시오. 배지의 최종 pH는 7.2 ± 0.2.
탈수 된 매질의 색상은 밝은 베이지 색이며 준비된 색은 연한 호박색입니다..
발효 시험 준비
이전의 준비 - 소독 전에 탄수화물은 최종 농도 1 %에 Andrade 지시약 (acid fuchsin) 또는 페놀 레드 (0.018 g / L)를 첨가해야합니다. 가스 형성 관찰을위한 Durham 종을 튜브 위에 놓아야한다..
다른 펩톤 타의 수 변종
-펩톤 물 완충 또는 완충
그것은 카제인 효소 가수 분해물, 염화나트륨, 인산이 수소 칼륨 및 인산 수소 12 수화물을 포함합니다. 최종 pH는 7.0 ± 0.2이다..
준비를 위해 탈수 된 배지 20g을 달아 증류수 1L에 녹입니다. 대략 5 분 정도 기다리십시오. 완전히 녹을 때까지 1 분간 가열한다..
필요에 따라 적당한 병에 붓는다. 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브를 사용하여 살균하십시오..
-알칼리성 펩톤 물
탈수 된 매질 25g을 물 1L에 녹인다. 위에서 설명한대로 진행하십시오. pH 범위는 8.3에서 8.7.
사용
접종은 샘플을 직접 배치하여 이루어집니다..
특히 박테리아가 손상되었을 것으로 의심 될 때 시료를 희석하는 데 사용됩니다. 보통 희석은 1:10과 1 : 100입니다..
35-37 ° C에서 곡물에 24 시간 동안 품어 둔다..
의자 샘플
살모넬라 균을 찾고있는 대변 표본의 경우, 미리 농축 된 배지로 완충 또는 완충 된 물을 사용하는 것이 좋습니다..
이렇게하려면 다음을 수행하십시오.
대변이 형성되면 시료 1g을 취합니다. 액체 상태 인 경우, 대변 1ml를 취해 완충 된 펩톤 물 10ml가 든 튜브에 현탁하십시오. 직장 면봉의 경우 완충 된 펩톤 처리 된 물로 면봉에 담긴 물질을 튜브 안으로 배출하십시오.
모든 경우에 샘플을 잘 섞고 균질화하십시오.
37에서 품어 ° C 18 24 시간. 이어서 셀레 나이트 시스틴 배지 또는 테트라 티 오 네이트 브로스와 같은 농축 배지에서 37 ℃에서 18-24 시간 동안 배양한다. 마지막으로 SS agar, XLD agar, Hektoen agar와 같은 Salmonella의 선별 배지에서 배양하십시오.
음식 샘플
펩톤 물은 농축 배지 또는 간단한 희석제로 사용되지만, 살모넬라 균종을 찾으면 이미 설명한대로 미리 농축 배지로 사용됩니다..
식품에서 다음과 같이 진행하십시오 :
고체 식품의 경우 시료 25gr을, 액체 식품의 경우 25ml를 측정하십시오. peptonated 물의 225 ml를 포함하는 플라스크에 부분을 넣으십시오. 샘플을 혼합하고 균질화하십시오..
미생물 부하가 높다고 의심되면 콜로니 형성 단위 (CFU) 계산을 용이하게하기 위해 연속 희석 또는 소수 자리를 만들 수 있습니다..
희석 횟수는 표본 유형 및 분석 경험에 따라 달라집니다.
반대로 미생물 부하가 매우 낮다고 의심되면 희석 할 필요가 없습니다. 이어서, 선택성 배지에서 계대 배양.
해산물, 생선 등 바다에서 나온 음식의 경우, 비브리오 콜레라 또는 다른 Vibrio 종, pH 8.5로 조정 된 펩톤 물 (알칼리성 펩톤 물)을 사용해야합니다.
품질 관리
준비된 각 배치에서 1 ~ 2 개의 튜브를 37 ℃에서 에어로 바이오 시스에서 24 시간 동안 접종없이 배양해야한다. 시간이 끝나면 혼탁이나 변색이 관찰되지 않아야한다..
또한 잘 알려진 통제 균주를 사용하여 그 효과를 평가할 수 있습니다.
이를 위해 다음 세균 균주를 사용할 수 있습니다. 대장균 ATCC 25922, 대장균 ATCC 8927, 포도상 구균 (Staphylococcus aureus) ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, 살모넬라 티피 무리 움 ATCC 1428, 살모넬라 장염 균 ATCC 13076.
모든 경우에 만족스러운 미생물 발달이 예상되며 이는 배지의 탁도에 의해 관찰된다.
제한 사항
-탈수 된 매질은 매우 흡습성이 있으므로 습기가 없어야합니다.
-몇 가지 유형의 열화가 관찰되는 경우 매체를 사용하지 않아야합니다..
-탈수 된 배양액은 10 - 35 ° C
-준비된 배지는 냉장 보관해야합니다 (2-8 ° C).
참고 문헌
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B 및 Velázquez O. 식품의 미생물 분석 기술. 2009, 2nd ed. UNAM 화학 학부. 멕시코 UNAM 1 화학 교수의 매뉴얼 및 문서 (AMyD) 관리자 버전. http://depa.fquim.unam.mx에서 다운로드 할 수 있습니다.
- 영국 실험실. Peptonada 물을 버퍼. 구매 가능 : britanialab.com
- Neogen Laboratories 펩톤 물. 구매 가능 : foodsafety.neogen.com
- 영국 실험실. 펩톤 물. 구매 가능 : britanialab.com
- 머크 연구소 완충 된 펩톤 물. 구매처 : merckmillipore.com
- 실험실 Conda Pronadisa. 알칼리성 펩톤 물. 구매 가능 : condalab.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.