몫:
한천 TSI 기초, 준비 및 사용
그 TSI 한천 또는 iron triple sugar 한천은 그람 음성균의 초기 동정을 유도하는 생화학 적 시험 역할을하는 고체 배지입니다. 이것은 현재 존재하는 당의 발효를 증명하고, 황화수소와 가스의 생산을 증명합니다.
그것의 구성과 기초는 Kligler 철 테스트와 매우 유사하며, 후자는 포도당과 유당만을 포함한다는 차이점이 있습니다. 대신, 이름에서 알 수 있듯이, 3 중 철분 철에는 3 가지 발효 성 탄수화물 인 포도당, 유당 및 자당이 들어 있습니다..
또한 TSI 배지에는 효모 추출물, 고기 추출물, 펩톤 및 프로 테오 세제 펩톤과 같은 영양가 높은 한천을 만드는 4 가지 단백질 유도체가 있습니다. 또한 황산 제 1 철, 티오 황산나트륨, 염화나트륨, 페놀 레드 및 한천을 함유하고 있습니다..
미생물이 배지에 존재하는 글루코오스를 발효시킬 수 없다는 사실은 즉시 Enterobacteriaceae Family에 속하는 것을 배제한다. 그러므로이 시험은 속 (genus)과 종 (species)을 결정하기 위해 어떤 확인 경로가 취해 져야 하는지를 결정하는데 필수적이다.
각 실험실은 TSI agar 또는 Kligler 한천 한천과 함께 작동하는지 여부를 결정합니다..
색인
- 1 재단
- 1.1 염화나트륨 및 한천
- 1.2 pH 지시약 (페놀 레드)
- 1.3 단백질 유도체 (효모 추출물, 고기 추출물, 펩톤 및 프로 테오스 펩톤)
- 1.4 탄수화물 (포도당, 젖당 및 자당)의 발효
- 1.5 가스 생산
- 1.6 티오 황산나트륨 및 황산 암모늄 (황화수소 생성)
- 2 준비
- 3 용도
- 4 씨앗
- 5 제한 사항
- 6 참고 문헌
재단
화합물들 각각은 매질 내에서 기능을 수행한다.
염화나트륨 및 한천
염화나트륨은 매질의 삼투 평형을 유지하는데 필요하다. 한천은 견고한 일관성을 제공하지만.
PH 지시약 (페놀 레드)
준비된 매질의 pH는 7.3으로 균형을 이루고 pH 지시약 (페놀 레드)은 6.8 이하로 황색으로 변합니다. 이것은 설탕의 발효에 의해 생성 된 소량의 산이 배지를 적 오렌지에서 황색으로 바꿀 것임을 의미합니다.
발효가 일어나지 않으면 펩톤을 사용하여 배지가 알칼리화되고 붉은 오렌지색에서 강한 붉은 색으로 변합니다..
단백질 유도체 (효모 추출물, 고기 추출물, 펩톤 및 프로 테오 세스 펩톤)
박테리아가 TSI 한천에 존재하는 단백질을 대사 할 때, 반응은 산소가 필요하기 때문에 매체를 알칼리화하는 아민이 생성됩니다 (주로 경사 수준). 아민은 베젤을 강한 빨간색으로 바꿉니다..
그러나 이것은 박테리아가 탄수화물을 발효시키는 능력에 달려 있습니다..
탄수화물 (포도당, 유당 및 자당)의 발효
설탕의 발효에 대한 연구는 여러 이미지를 줄 수 있으며 각각의 이미지는 다르게 해석됩니다. 시험의 해석은 미생물을 비 포도당 발효기, 비 락토오스 발효기 및 락토오스 / 슈 크로스 발효기의 3 가지 범주로 나눈다.
배지 내 포도당의 양은 제한되어 있지만 락토오스와 수크로오스의 농도는 10 배 높다는 점에 유의해야합니다.
Enterobacteriaceae 계통의 박테리아와 다른 포도당 발효 미생물은 에너지를위한 가장 간단한 탄수화물이기 때문에이 당류를 발효시키기 시작할 것입니다..
반면에 락토스와 수크로오스는 복잡한 탄수화물로 분해되어 포도당으로 전환되어 엠덴 - 마이어 호프주기에 들어갈 수 있습니다.
-비 발효 포도당 미생물
접종 된 미생물이 포도당을 발효시킬 수 없을 때 다른 탄수화물을 발효시킬 수있는 확률은 훨씬 적습니다. 따라서 산은 여기에 형성되지 않지만 펩톤을 사용하기 때문에 베벨에 아민이 형성됩니다.
이 경우 경사가 더 강한 빨간색으로 바뀌고 튜브의 바닥이 변하지 않거나 알칼리화되어 전체 빨간색 튜브가 남습니다.
해설 : K / K는 알칼리 사면 / 알칼리성 또는 중성 배경을 의미합니다.
기사의 시작 부분에있는 이미지에서 튜브 D의 이미지를 볼 수 있습니다..
이 결과는 미생물이 Enterobacteriaceae 계통에 속하지 않음을 나타낸다..
-락토오스 / 수크로오스의 비 발효 미생물
박테리아가 젖당이나 자당이 아닌 포도당을 발효시킬 수 있다면 다음과 같이됩니다 :
박테리아는 약 6 ~ 8 시간 후에 존재하는 모든 포도당을 소비하여 베벨과 타코를 산성화 할 수 있습니다. 즉, 한천은 완전히 황색으로 변할 것입니다. 그러나 포도당이 고갈되고 유당과 자당을 사용할 수 없게되면 박테리아는 단백질의 신진 대사를 시작합니다.
이 반응은 산소를 필요로하므로 펩톤 분해가 표면 (경사)에서 발생합니다. 아민은 노란색에서 빨간색으로 바꿈으로써 베젤을 알칼리화합니다. 이 반응은 18 ~ 24 시간의 배양에서 입증됩니다.
해석 : K / A는 알칼리 사면과 산 타코를 의미한다..
기사의 시작 부분에있는 이미지에서 튜브 B의 이미지를 볼 수 있습니다..
-유당 / 자당 발효 미생물
명백히, 락토오스 및 수크로오스를 발효시킬 수있는 미생물은 포도당을 발효시킬 수있다. 매질 중에 존재하는 최소량의 글루코오스가 모두 소모 된 후, 형성된 피루브산은 크렙스의 호기성 사이클을 통해 대사를 시작하여 8 내지 12 시간 동안 모든 매질은 황색을 띤다.
박테리아가 젖당이나 자당을 분해 할 수 있다면 산은 계속 생산 될 것이고 18-24 시간 후에 전체 관 - 부리와 타코 -는 노란색으로 남을 것입니다.
포도당의 사용은 두 가지 방식으로 이루어집니다 : 하나는 튜브의 베벨 (bevel)에있는 호기성 형태로, 다른 하나는 튜브 바닥에 혐기성없이 (anaerobically).
해석 : A / A는 산 경사 / 산 바닥을 의미합니다. 그것은 가스를 나타낼 수 있습니다..
기사의 시작 부분에있는 이미지에서 튜브 A의 이미지를 봅니다..
가스 생산
일부 미생물은 당의 발효 중에 가스를 생성 할 수 있습니다. 가스는 한천 내부에서 작용하는 압력에 의해 튜브에서 입증됩니다. 압력은 거품의 형성 또는 한천의 변위를 일으킨다. 때때로 가스 형성은 매체를 파괴 할 수있다..
TSI 배지를 시딩 할 때 한천의 중심이 바닥에 닿을 때까지 구멍을 뚫어주는 것이 중요합니다. 펑크가 튜브의 벽을 향하여 우회되면 잘못 형성된 채널을 통해 빠져 나올 수 있기 때문에 가스 생성에 오 탐지 (false positives)를 일으킬 수 있습니다.
가스 생산 및 베젤 한천에서 발생하는 산소를 필요로하는 반응은, 그러므로 튜브면 플러그가 꽂혀 것을 권장하고 베이클라이트 캡을 사용하는 경우,이 완전하게 설정하지 말아야합니다.
가스 생산은 양 (+) 또는 음 (-)으로보고됩니다..
티오 황산나트륨 및 황산 제 1 철 (황화수소의 생산)
황화수소 (무색의 가스)를 생성 할 수있는 박테리아는 배지에 존재하는 티오 황산나트륨의 황을 취합니다. H가 형성되면2S는 철 황산 암모늄과 반응하여 황화철 (흑색의 침전물이 명확하게 보임).
H의 생산2S는 양성 (+) 또는 음성 (-)으로보고됩니다..
기사의 시작 부분에있는 이미지에서 튜브 C의 이미지를 볼 수 있습니다..
준비
탈수 된 3 배당 설탕 (TSI) 한천 62.5g을 증류수 1 리터에 녹인다..
한천이 완전히 녹을 때까지 가열하십시오. 자주 분간 끓으십시오. 목화 뚜껑이 달린 13/100 시험관에 배지 4 ml를 분배하십시오.
121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 소독하십시오. 오토 클레이브에서 꺼내어 기울어 진 상태로 둡니다. 받침대와 베젤이 동일한 거리를 유지해야합니다..
냉장고에 2-8 ° C에서 저장하십시오. 박테리아 균주를 심기 전에 성질을 유지하도록하십시오..
탈수 된 매체의 색은 연한 베이지 색이며 준비된 매체는 적색 주황색이다.
준비된 배지의 최종 pH는 7.3 ± 0.2.
용도
TSI 테스트는 미생물학 실험실 수준에서 널리 사용됩니다. 이 테스트는 속 (genus)과 종 (species)의 확인에 도달하기 위해 적용되어야하는 테스트 유형을 안내하는 데 필수적입니다. 그것의 좋은 실행 및 해석은 물자를 저장하고 일할 수있다.
결과는 TSI K / K이고, 시토크롬 옥시 다제 테스트가 긍정적이면, 이러한 슈도모나스, 알칼리 게 네스, 아크 로모 박터, 다른 장르 중 부르크 홀데 그람 간균, 비 발효조를 식별하기위한 검사가 사용되어야하는 것으로 알려져있다. 그것은 부정적인 oxidase 있다면 그것은 Acinetobacter, Stenotrophomonas 등으로 향하고있다..
당신은 TSI A /을 얻거나 K / A와 시토크롬 산화 효소 검사가 부의 경우에, 더 아질산염을 질산염을 감소, 그것은 가족 장내 세균에 속하는 미생물임을 확신이있다. 이 경우 식별 경로는이 세균 군에 대한 특정 검사를 지향합니다.
또한, K / A 또는 A 경우 / A 이미지와 시토크롬 옥시 다제 시험, 예컨대 모나스 같은 장내 세균 군에 속하지 않는 발효 균주, 식별 목적으로한다 탈 추가 테스트를 얻을 긍정적 Plesiomonas, Vibrio 및 Pasteurella.
황화수소, 음성 산화 효소 (negative oxidase)를 가진 TSI는 Enterobacteriaceae 계통의 다음 속의 신원을 안내 할 것입니다 : Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella 또는 Salmonella.
알칼리성 바닥과 양이온 산화 효소가있는 알칼리 사면의 희소 또는 중등도 황화수소가있는 TSI는 그람 음성균 인 비 발효성 간균을 동정하기 위해 H2S와 같은 Shewanella putrefaciens.
마지막으로, TSI는 그람 양성균에서 황화수소의 생산에 대한 조사에 사용될 수 있는데 특히 의심되는 경우 Erysipelothrix rhusiopathiae.
뿌려졌다.
TSI 배지에는 1 차 또는 선택적 배양 물에서 분리 된 순수한 콜로니를 접종해야합니다. 식민지가 혼합 된 식물상을 가진 표본으로 뿌려진 선택 배지에서 취해진다면 식민지 하부에서 배지에서 저해 된 생존 가능한 균주가있을 수 있으므로주의를 기울여 표면 만 잡아야한다.
따라서 루프를 선택 배지에서 냉각시켜 절대로 콜로니를 취하고 TSI 배지에 접종해서는 안됩니다.
심기는 직선 루프 또는 바늘로 이루어집니다. 바닥에 도달 할 때까지 중앙의 중앙을 관통하여 조심스럽게 구멍을 뚫은 다음 표면에 지그재그 식으로 접종을 완료합니다. 두 번 구멍을 내지 마라..
37 ℃에서 18-24 시간 동안 에어로빅 (aerobiosis)에서 배양하십시오. 전후 어느 때이 시점에서 해석.
제한 사항
TSI 검사는 18 시간에서 24 시간 사이의 인큐베이터에서 실시해야합니다. 이 시간 이전의 독서는 A / A 발효에 대해 거짓 긍정을 줄 수 있습니다. 반면,이 시간 이후의 독서는 매개체를 알칼리화시키는 펩톤의 소비 때문에 비 발효조의 잘못된 음성 이미지를 야기 할 수 있습니다.
참고 문헌
- Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 세균의 동정을위한 생화학 적 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스 아르헨티나.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 학적 진단. 5th ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
- "TSI 한천." 위키 백과, 무료 백과 사전. 2018 년 7 월 10 일 08:09 UTC. Feb 10 2019, 03:33 이용 가능 : en.wikipedia.org
- 영국 실험실. TSI 한천 (3 배 설탕 한천). 구매 가능 : britanialab.com
- BD 실험실 트리플 설탕 한천 (TSI 한천). 2003. 사용 가능 : bd.com