몫:
Agar Thayer 마틴 기초, 준비 및 사용
그 Thayer Martin 한천 그것은 고립을위한 매우 영양가 있고 선택적인 고체 배지입니다. Neisseria meningitidis 및 Neisseria gonorrhoeae; 병원성 또는 임상 적으로 중요한 Neisseria.
Thayer Martin 한천의 가장 중요한 특징 중 하나는 높은 영양 보충제입니다. Neisserias는 영양 관점에서 볼 때 매우 까다로운 미생물이므로 공통적 인 매개체에서 자라지 않기 때문에이 특성은 없어서는 안될 필수 요소입니다.
또한, 이들 미생물은 일반적으로 속 나이 세리아의 발전에 영향을주지 않고, 그것은 필요한 다른 식물의 성장을 방지하기 위해 억제제를 추가하는 비 멸균 지역에서 발견되기 때문에.
이 한천은 GC 기본 한천, 헤모글로빈, 추가 영양 보충제 및 억제 물질 복합체 (항생제 및 항진균제)로 구성됩니다. 상업용 주택은 각 보충제를 별도로 판매합니다..
이 배지에 심는 샘플은 찾고있는 미생물에 달려있다. ~까지 Neisseria 임질 이상적인 샘플은 질 및 요도 분비물입니다. 동안 동안 Neisseria meningitidis 가장 많이 사용되는 샘플은 뇌척수액, 인두 및 비 인두의 삼출물.
색인
- 1 재단
- 1.1 GC 한천
- 1.2 헤모글로빈
- 1.3 농축 보충 교재
- 1.4 억제 물
- 2 준비
- 2.1 원래 Thayer Martin Agar
- 2.2 Agar Thayer Martin 수정
- 3 사용
- 4 품질 관리
- 5 제한 사항
- 6 참고 문헌
재단
Neisserias는 귀찮은 것으로 분류 된 미생물이므로 격리가 어렵습니다. 이러한 이유로 Thayer Martín은 복잡한 매체이며 각 구성 요소는 아래에 설명 된 기능을 수행합니다.
GC 코어 한천
GC 한천에는 프로 테오스 펩톤, 옥수수 전분, 염화나트륨, 인산 2 칼륨, 인산 일 칼륨 및 한천이 포함되어 있습니다. 구성 요소는 미생물의 성장, 독성 지방산, 삼투압 균형을 유지 pH를 정의하고 고체 배지에 일관성을 제공하는 데 도움이 중화 기본적인 영양소를 제공.
헤모글로빈
헤모글로빈은 V 및 X 인자 (니코틴 아미드 아데닌 디 뉴클레오티드 NAD 및 헤민)를 제공한다. 따라서이 환경에서 헤모필루스 종도 자랍니다. 헤모글로빈은 탈수 형태로 상업적으로 얻을 수 있거나 신선한 제세동 소 혈액을 배지에 첨가 할 수 있습니다.
보충 보충 교재
한천베이스가 포함 된 영양소는 속 나이 세리아의 요구 사항에 충분하지 않기 때문에 또한, 평균 이어 마틴은 또한 보충 농축을 추가 할 예정.
가장 보편적으로 사용되는 농축 보충제는 isovitalex입니다. 이 글루타민, 아데닌, NAD, cocarboxylase, 구아닌, 질산 철, P 아미노 벤조산, 비타민 B12, 티아민 및 글루코스를 포함한다. 이들 모든 화합물은 병원성 Neisseria의 적절한 개발에 필요하다..
억제제
그것이 매우 영양가가 높은 배지이기 때문에, 저해제는 지역의 보통 식물상의 미생물의 성장을 방지하고 따라서 속 Neisseria의 격리를 선호하는 데 사용해야합니다..
저해제 복합체는 반코마이신 (vancomycin), 콜리스틴 (colistin) 및 나이 스타틴 (nystatin)으로 구성됩니다. 반코마이신은 그람 양성 세균의 성장은, 콜리 스틴 등 슈도모나스 일부 나이 세리아 잡균 등의 그람 음성균의 발전 저해를 방지하고, 니 스타틴은 효모에 작용 칸디다 알비 칸스.
그러나 Thayer Martin 한천은 수정되었습니다. 변화는 trimethoprim의 첨가, 한천의 양의 증가 및 여분의 포도당의 첨가로 이루어졌다. 이러한 변화는 종의 회복을 상당히 개선시켰다. Neisseria gonorrhoeae.
trimethoprim은 Proteus 속의 성장과 그에 따른 무리 형성을 억제한다는 점에 유의해야합니다. 이러한 의미에서, 항생제는 Thayer Martin 배지에 선택적 성질을 제공합니다..
준비
원래 Thayer Martin Agar
-GC 한천
건조한 GC 배지 8.2g을 달아 100ml로 부유시킨다. 자주 섞어서 1 분간 섞고 끓여서 완전히 녹인다. 121 ℃에서 15 분간 오토 클레이브에서 혼합물을 소독한다..
-2 % 헤모글로빈
뜨거운 증류수 2 또는 3ml에 탈수 된 헤모글로빈 2g을 넣고 균일하게 혼합한다. 100ml의 물을 조금 더 채워 물을 채 웁니다. 멸균하기 전에 현탁액을 균일하게해야합니다..
오토 클레이브에서 15 분간 살균하십시오..
-보충 보충 교재
동일한 상업 집에서 제공하는 희석제로 상업 도로를 재구성하십시오. 잘 섞는다. 희석액의 사용량은 키트 설명서에 명시되어 있습니다..
-억제 보충제 V.C.N (반코마이신, 콜리스틴, 나이 스타틴)
상업 집에서 제공하는 희석제로 유리 병을 재구성하십시오. 잘 섞는다. 희석액의 사용량은 키트 설명서에 명시되어 있습니다..
-준비된
GC agar 100 ml마다 다음과 같이 진행하십시오 :
오토 클레이브 GC 한천을 떠날 때, 50 ° C의 온도 및 첨가 제조 헤모글로빈 용액 2 ㎖로 냉각 2 mL로 농축 (isobitalex 또는 britalex) 2 mL를 보충 억제 보충 할 수있다. 멸균 배양 접시에서 섞어서 먹는다..
사용하기 전까지 고형화 및 냉장고 보관.
준비된 매체의 색상은 체리 레드입니다. 배지의 최종 pH는 7.2 ± 0.2
수정 된 Thayer Martin Agar
건조한 GC 배지 8.2g을 달아 100ml로 부유시킨다. 한천 1g을 넣고 포도당 0.3g을 넣는다. 자주 섞어서 1 분간 섞고 끓여서 완전히 녹인다. 121 ℃에서 15 분간 오토 클레이브에서 혼합물을 소독한다..
위에서 설명한대로 헤모글로빈과 농축 보충 물을 준비하십시오..
사용 된 억제 보충제는 V.C.N.T (반코마이신, 콜리스틴, 나이 스타틴, 트리 메토 뿌림).
-준비된
기존 Thayer Martin 한천에 대해 설명한대로 진행하십시오..
사용
Thayer Martin 한천은 샘플을 파종하기 전에 부드럽게해야합니다. 흔히 사용되는 표본은 인두 삼출물, 코 출혈, 질, 요도 및 / 또는 직장 분비 및 CSF입니다..
신선하게 채취 한 시료를 사용하여 한천에 강력한 접종 물을 만듭니다. 샘플은 물질 배출에 의해 직접 파종 된 후 표면의 붕괴에 의해 흘러 나옵니다.
플레이트를 microaerophilic jar (5 % CO)에서 35 ~ 37 ℃에서 24 ~ 48 시간 동안 배양한다2). 잠복기가 끝나면 판은 작고, 회색이며 때로는 점액과 같은 식민지에 대해 검사됩니다..
의심되는 콜로니에 그람 및 확인 생화학 검사를 수행하십시오..
품질 관리
Thayer Martin 한천의 품질 관리를 수행하기 위해 다음의 미생물 균주를 사용할 수 있습니다.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 및 Neisseria meningitidis ATCC 13090; 두 균주 모두에서 만족스러운 발달이 기대된다..
다음과 같은 균주도 포함되어야한다. 표피 포도상 구균 ATCC 14990, 대장균 ATCC 25922, 프로 테우스 미라 빌리스 ATCC 43071 및 칸디다 알비 칸스 ATCC 10231에 기술되어있다. 이들 모두에서,이 배지에서 전체 또는 부분 억제가 예상된다.
제한 사항
-사용 된 억제제에 저항성이있는 박테리아가 배지에서 자랄 수 있다는 사실을 염두에 두어야합니다..
-긴장감이있다. Neisseria 임질 이는 사용 된 반코마이신의 농도에 민감 할 수 있습니다. 이러한 이유로 isovitalex가 보충 된 초콜릿 한천을 병행하여 사용하는 것이 좋지만 억제제가없는 경우.
-이 배지에서 자랄 수 있고 병원성 Neisseria, 특히 gonococci의 분리를 방해 할 수있는 nystatin에 내성 인 효모 균주가 있습니다..
참고 문헌
- Valtek 진단 실험실. 한천 Thayer-Martin.2016. 구매 가능 지역 : com
- 영국 실험실. Thayer Martin 수정 된 매체. 구매 가능 : britanialab.com
- 위키 피 디아 공헌자. Thayer-Martin 한천. 위키 백과, 무료 백과 사전. 2017 년 10 월 26 일, 16:33 UTC. 이용 가능 : wikipedia.org4. 2019 년 2 월 28 일 액세스.
- 영국 실험실. GC 한천. 구매 가능 : britanialab.com.
- 실험실 BBL ™ 농축 미생물 농축 배지. 1999. 이용 가능 지역 : bd.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.