한천 TCBS 기초, 준비 ​​및 사용



그 TCBS 한천 Vibrio 박테리아의 분리 및 배양에 사용되는 매우 선택적이며 차별적 인 고체 배양 배지이며, 특히 Vibrio cholerae, V. vulnificus 및 V. 파라 히로 폴리스티스 이 속의 주요 병원체로서.

약어 TCBS는 티오 설페이트 구연산염 담즙 백서를 의미합니다. 이 한천은 또한 Vibrios의 선택 배지로 알려져 있습니다. 원래 공식은 나카니시 (Nakanishi)에 의해 만들어졌고 후에 고바야시 (Kobayashi)에 의해 수정되었습니다..

그것은 효모 추출물, 고기 펩톤, triptein, 구연산 나트륨, 티오 황산나트륨, 황 담즙, 자당, 염화나트륨, 시트르산 철, 브로 모 티몰 블루, 티몰 블루 및 한천으로 구성되어 있습니다.

이 조성물은 물, 대변 및 식품 샘플로부터 비브리오 종의 적절한 개발을 가능하게합니다. 를 제외하고 비 블로 홀리 사에, 이 매체에서 성장하지 않습니다. 또한, TCBS 배지는 다른 동반 박테리아, 특히 대장균의 증식을 억제 할 수있다.

비브리오 (Vibrio) 속의 일부 종에서 생산되는 심한 위장 및 외장 문제로 인해 진단이 매우 중요합니다. 사람은 주로 생선이나 덜 익힌 해산물 또는 오염 된 물의 소비뿐 아니라 상처 감염을 통해 감염됩니다.

이 때문에 임상 실험실은 액체 대변 샘플의 변 배양 연구에서 TCBS 한천을 포함해야하며, 특히 쌀 물이 나타나야합니다. 특히 환자가 바닷물에 접촉했거나 해산물이나 생선을 섭취했다고보고 한 경우.

색인

  • 1 재단
  • 2 준비
  • 3 사용
  • 4 씨앗
  • 5 제한
  • 6 품질 관리
  • 7 참고

재단

효모 추출물, 고기 펩톤 및 트립신은이 배지의 영양 공급원입니다. 그러나 TCBS 한천은 대부분의 박테리아에 대한 불쾌한 매개체입니다.

그것의 높은 선택성은 구연산 나트륨과 황소 담즙의 첨가에 의해 주어진다; 둘 다 매체에 알칼리성 pH를 제공하고, 동반 된 식물상의 성장을 제한하며, 성장을 촉진하는 억제제이다 V. 콜레라, 다른 종 중에서. 그것은 주목해야한다. 비브리오 콜레라 가슴 앓이에 매우 민감하다..

염화나트륨은 삼투압을 매체에 균형을 유지합니다. 또한 농도가 높기 때문에 저염 균의 성장에 유리한 억제제 역할을합니다.

자당은 브로 모티 몰 및 티몰 블루의 청색 pH 지표와 함께 발효 가능한 설탕으로 미립자 특성을 매개체에 부여합니다. 이러한 이유로,이 수단을 이용하여 자당 발효 균주를 비 발효 균주와 분화시키는 것이 가능하다.

수크로오스 발효 균주의 콜로니는 황색을 나타내며 산 생산으로 인해 초록색에서 황색으로 변할 것입니다. 비 발효조는 반투명하고 배지는 원래의 색 (녹색).

마찬가지로,이 매질은 황의 공급원 인 티오 황산나트륨과 노출 제로서의 구연산 철을 함유하고있다. 둘 다 황화수소 (무색의 가스)를 생성 할 수있는 박테리아를 보여줍니다. H2S는 티오 설페이트로부터 형성되고, 나중에 시트르산 철과 반응하여 가시적 인 흑색 침전물이 형성된다.

마지막으로 한천은 매체에 견고한 일관성을 부여합니다.

준비

건조한 배지 89gr을 칭량하고 증류수 1L에 녹입니다. 난방 및 빈번한 교반으로 해산에 도움. 혼합물은 2 분간 끓일 수있다..

이 매체는 오토 클레이브하지 않습니다. 그것의 용해 후에 그것은 살균 플레이트에 직접 제공됩니다. 응고 될 때, 이들은 플라크 제작자에서 거꾸로 배열되고 냉장고에 보관 될 때까지 (2-8 ° C) 보관됩니다.

조제 후 배지는 pH 8.6 ± 0.2이어야한다..

탈수 된 배지의 색은 연한 베이지 또는 녹색 - 베이지 색이며, 배지의 색은 숲 녹색 또는 푸른 녹색이다..

샘플을 파종하기 전에 플레이트를 템퍼링 상태로 두는 것이 중요합니다..

사용

Vibrios의 분리를위한 가장 일반적인 샘플은 설사 변입니다.

선택 배지에 즉시 뿌릴 수 없다면 대변 샘플은 캐리 블레어 중간에 운송해야합니다.

배양 물의 민감도를 높이기 위해 pH 8.4의 펩톤 물을 배양액으로 최대 8 시간 동안 통과시킬 수 있습니다.이 배양 물은 TCBS 배지로 계대 배양됩니다..

또한 Vibrios의 일부 균주는 면역 억제 환자에서 패혈증을 일으킬 수 있으므로 혈액 배양으로부터 격리 될 수 있음을 명심해야합니다. 마찬가지로, 콜레라 질병의 전염병 발생이있을 때 바다의 물과 음식 샘플을 분석 할 수 있습니다.

뿌려졌다.

연구중인 표본의 접종 물이 두드러 져야하며, 파종은 고갈에 의한 스트라이팅 방법으로 수행됩니다. 플레이트를 37 ℃에서 24 시간 동안 항생제 배양합니다.

가정의 식민지 비브리오 콜레라 중간 크기이고, 매끄럽고 불투명하며, 자국을 발효시키기 때문에 얇은 가장자리와 황색을 띤다..

비슷한 방법으로, V. 알지 놀리 투스, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii 일부 V. vulnificus. 임상 적으로 중요한 다른 Vibrios 종 V. 파라 히로 폴리스티스 자당을 발효시키지 않고 올리브 그린 콜로니로 발전시킨다..

다른 한편, 우리는 oxidase (+) 인 Aeromonas와 Plesiomonas의 일부 균주가이 배지에서 자랄 수 있다는 것을 명심해야하며, 임상의를 혼란스럽게 할 수있는 노란색 콜로니가 생길 수 있습니다. 슈도모나스 (Pseudomonas)의 일부 균주는 산화 효소 (+)도 녹색 콜로니뿐만 아니라 V. 파라 히로 폴리스티스.

제한

Vibrio 속에 긍정적 인 산화 효소 검사는 TCBS 한천에서 얻은 식민지에서 수행해서는 안되며 결과는 거짓 음성이 될 것입니다. 이 시험에서 매체의 화합물이 강하게 간섭합니다. 따라서 혈액 한천 배양기에서 수행해야합니다.

품질 관리

배지가 양호한 상태임을 입증하기 위해 알려진 또는 입증 된 대조 균주를 재배하고 성장이 예상되는 특성을 충족하는지 관찰하는 것이 좋습니다.

이를 위해,

-비브리오 콜레라 - 만족스러운 성장 (노란색 식민지, 반투명 국경).

-Vibrio parahaemolyticus - 만족스러운 성장 (녹색 중심과 반투명 경계가있는 식민지).

-비브리오 알지 놀티 쿠스 ATCC 17749 - 만족스러운 성장 (식민지 주변에서 같은 색의 후광이있는 노란색 콜로니).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - 전체 또는 부분 억제 (작은 노란색 또는 반투명 콜로니).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- 부분 또는 전체 저해 (파란색 콜로니).

-대장균 ATCC 25922 - 완전히 금지됨.

-프로 테우스 미라 빌리스 ATCC 43071 - 전체 또는 부분 억제. (작은 식민지 센터 녹색 반투명 ​​가장자리).

멸균되지 않은 배지의 인큐베이션은 변경되어서는 안된다..

참고 문헌

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS 한천. 2009. 이용 가능 : f-soria.es
  2. BD 실험실. BD. TCBS Agar 2003. 사용 가능 시간 : bd.com
  3. 영국 실험실. TCBS 매체. 구매 가능 : britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS 한천. 구매 가능 : foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 학적 진단. 5th ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.