파파 포도당 기초, 준비 ​​및 사용



그 파파 포도당 한천 그것은 고체, 비 선택적 영양 문화 매체입니다. 그것은 박테리아와 곰팡이 종을 자랄 수 있지만, 그것의 사용은 특히 사상 균류와 효모의 분리를 나타냅니다. 그것은 또한 영어 표현 감자 덱 스트로스 한천에 의해 PDA 매체로 알려져 있습니다.

그것은 식물 병원성 진균, 즉 식물에 영향을 미치는 균의 분리에 특히 유용합니다. 감염된 식물에서 시료를 채취하기 위해서는 Sabouraud agar 나 malta agar와 같은 다른 배지를 사용할 수 있지만 일상적으로 사용하기 위해서는 감자 덱 스트로 한 한천이 더 큰 포자 화 때문에 선호된다..

또한 화장품, 의약품 및 일부 유제품 샘플의 곰팡이 식민지 계산에 사용됩니다. 마찬가지로,이 물질에서 매우 잘 자라는 피부 진균을 찾아 피부 긁기 샘플을 심는 것이 적절합니다. 특징적인 안료를 개발하는 것입니다.

감자 덱스 트로 오스 배지는 실험실에서 매우 간단하고 쉽게 준비 할 수 있습니다. 이름에서 알 수 있듯이 감자 주입, 포도당 및 한천이 포함되어 있습니다. 또한 박테리아 성장을 방지하고 진균 종에 대한 선택성을 증가시키기 위해 억제 물질을 첨가 할 수있다.

색인

  • 1 재단
  • 2 준비
    • 2.1 - 파파 포도당 한천의 직접 만든 (비상업적 인) 준비
    • 2.2 - 파파 포도당 한천의 상업적 준비
  • 3 용도
    • 3.1 감자 덱 스트로스 한천에 식물 시료를 심는 과정
    • 3.2 파파 덱스 트로 한천에 피부, 모발 또는 손발톱 샘플을 심는 과정
    • 3.3 식별 절차
    • 3.4 식민지 조사
    • 3.5 진균 균주의 유지
  • 4 품질 관리
  • 5 참고

재단

Papa 덱스 트로 우스 아가 (Papa dextrose agar)는 사상 균류 및 효모의 발달에 필요한 영양 요소를 제공하는 배지입니다.

포도당과 감자의 혼합은 곰팡이의 만족스러운 성장을위한 완벽한 에너지 원을 제공합니다. 한천은 환경에 일관성을 제공하는 것입니다.

배지만으로 박테리아의 성장을 억제하지 않으므로 비 선택적 배지입니다. 선택성으로 만들기 위해서는 타르타르산이나 항생제와 같은 억제 물질을 첨가해야합니다..

준비

-수제 (비상업적 인) 감자 덱스 트로 한 한천 준비

페트리 접시

다음과 같은 방법으로 준비됩니다 :

우선, 감자는 잘 씻겨 져서 흙을 제거합니다. 그들은 모든 것과 쉘을 가진 얇은 조각으로 잘립니다. 감자 200g을 칭량하고 1 시간 동안 증류수 1L에 넣고 끓인다..

시간이 지나면 거즈를 통해 모든 준비가 여과되거나 긴장됩니다..

수득 된 액체는 1 리터에 도달 할 때까지 증류수로 완료된다. 주입 물에 20g의 한천과 덱스 트로 오 20g을 넣고 잘 섞은 다음 121 ℃, 15 파운드의 압력에서 15 분간 고압 가압.

50 ° C로 식히고 무균 페트리 접시에서 제공하십시오. 준비된 접시는 냉장고에 보관됩니다..

웨지

파파 덱스 트로 한천 쐐기도 준비 할 수 있습니다..

이 경우 오토 클레이브에서 멸균하기 전에 12 ~ 15ml의 배지를 튜브에 넣은 다음 오토 클레이브하고 응고 될 때까지 특수 지지대 위에 놓습니다. 냉장고에 저장하십시오..

배지는 5.6 ± 0.2의 pH를 유지하지만 일부 실험실에서는 10 % 타르타르산을 첨가하여 박테리아 성장을 억제하기 위해 pH를 3.1 ± 0.1로 낮춘다.

같은 의미에서, 다른 실험실은 항생제를 첨가하여 곰팡이를 재배하고 박테리아 발생을 방지하도록 선택합니다.

-감자 덱스 트로 한천의 상업적 준비

상업적으로 이용 가능한 탈수 된 매체 39g을 칭량하고 증류수 1L에 용해시킨다. 5 분간 쉬어 라..

혼합물을 완전히 용해 될 때까지 자주 교반하여 가열한다. 이어서 121 ℃에서 15 분간 오토 클레이브에서 멸균시킨다..

플레이트 또는 쐐기를 준비 할 수 있습니다. 위에서 설명한대로 진행하십시오..

pH는 5.6 ± 0.2로 유지된다. 3.1의 ​​pH가 요구된다면, 20 % 멸균 타르타르산 14ml를 접시에 담기 전에 첨가해야한다..

준비가되지 않은 매체의 색상은 베이지 색이며 약간 흐린 색이나 유광색의 외관을 지닌 가벼운 호박색입니다..

용도

감자 덱스 트로 한천에 식물 시료를 심기위한 공정

-얼룩이있는 잎

잎은 조각으로 잘립니다..

50 % 알코올을 포함한 50cc 유리에 잎 조각 (얼룩이 묻은 건강한 부분)을 놓고 20 ~ 30 초 동안 표면을 소독합니다. 얇은 잎이라면 알코올을 끌어 당기고 40 ~ 50 초 동안 20 % 차아 염소산 나트륨을 넣고 껍질을 벗기고 통나무가되면 80 초로 늘립니다..

차아 염소산 나트륨을 당기고 살균 된 클립으로 멸균 된 조각을 꺼내 매체의 표면에 놓습니다 (최대 10 개). 날짜를 기입하고 20에서 30 ° C까지 품을 수 있습니다..

-과일 및 괴경 용

과일이 다 육일 경우 곰팡이에 의해 영향을받는 열매를 열고 멸균 된 메스, 병든 부분과 건강한 부분으로 조각을 가져 와서 한천 표면에 놓습니다.

열매가 레몬 또는 오렌지와 같은 감귤 인 경우 열어야하며 씨앗을 뿌려야합니다.

열매의 표면에 영향을 미치고 포자가 관찰되면 접시에 강판을 뿌린 방법을 사용하는 것이 가장 좋습니다. 이것은 멸균되고 냉각 된 "L"형태의 주걱으로 포자를 만지게 한 다음 한천에서 2 ~ 3 회 지그재그 시드를 수행하는 것으로 구성됩니다.

-곡물 용

잎에서 묘사 된대로 살균 한 다음 한천에 넣습니다..

-가지와 줄기 용

껍질을 긁어 내고 건강하고 병든 부분을 한천에 직접 뿌려 놓습니다..

뿌려진 접시는 20-30 ° C에서 72 시간 동안 aerobiosis에서 배양됩니다.

파파 덱스 트로 한천에서 피부, 모발 또는 손발톱의 샘플 재배 과정

시료는 피부 혹을 찾는 데 영향을받은 모발, 피부 박편 또는 손톱을 자르기 위해 메스 블레이드 11 번을 사용하여 채취해야합니다. 샘플을 채우기 전에 70 % 알코올로 소독해야합니다..

-피부 샘플

비늘 모양의 병변에서 병변의 가장자리는 곰팡이를 발견 할 가능성이 있기 때문에 긁어 내야합니다..

삼출성 병소에서 샘플은 건조한 면봉이나 젖은 면봉으로 채취합니다. 감자 덱스 트로 한천 또는 사부 라우 한천에 즉시 뿌린다. 운송 수단 피하십시오.

샘플링의 또 다른 방법은 Mariat와 Adan Campos의 카펫 스퀘어 기법을 사용하는 것입니다. 이 경우 감염된 부위를 추가로 재배하기 위해 멸균 된 양모로 5 번 문지른다..

샘플을 배지에 직접 놓을 수 있습니다..

-모발 샘플

병리학에 따라 영향을받는 부분은 뿌리에 의해 잘 리거나 찢어 질 수 있습니다. 샘플을 배양 배지에 넣는다..

-손톱 샘플

영향을받는 손톱의 특정 부위를 긁거나자를 수 있습니다. 부상의 유형에 따라 다릅니다..

곰팡이가 배지와 접촉 할 가능성을 높이기 위해 파종 전에 샘플을 1mm 조각으로 자른다..

식별 절차

플레이트에서 얻어진 콜로니를 감자 덱스 트로 오스 한천이 들어있는 튜브에서 분리하여 콜로니에 대한 거시적 인 연구 (외관, 색상, 일관성, 발달 정도)를 수행한다..

현미경 적 연구 (구조물 및 구조물의 관찰)는 현미경 하에서 얇은 판과 얇은 판 사이의 미시 문화 또는 직접 관찰에 의해 수행 될 수있다.

식민지 조사

이 배지는 또한 식물 샘플, 식품, 화장품 또는 약물에 존재하는 진균 및 효모의 부하를 결정하는 데 사용될 수 있습니다. 이 목적을 위해 항생제가 보충 된 파파 덱스 트로 오스 한천이 사용됩니다 : (chloramphenicol, chlorotetracycline 또는 both).

멸균 된 빈 배양 접시에 1 ml의 샘플을 붓고 - 바람직하게는 희석 한 다음 감자 덱 스트로스 한천 플러그를 녹여 45 ° C로 식힌다. 페트리 접시 위에 붓고 균질해질 때까지 돌린다. 그것이 고형화 될 때까지 그것을 쉬게 두십시오..

20-25 ° C (곰팡이) 또는 30-32 ° C (효모)에서 5 일에서 7 일 이상 동안 에어로 비오스 (aerobiosis)에서 배양하십시오. 곰팡이의 종류와 샘플 유형에 따라 다릅니다. 2 개의 플레이트를 사용하여 두 온도 범위에서 인큐베이션 할 수 있습니다..

곰팡이 균주의 유지 관리

Papa 덱스 트로 오스 한천을 사용하여 수년 동안 살아있는 곰팡이 균주를 유지할 수 있습니다..

이를 위해 곰팡이는 파파 덱 스트로스 한천 웨지에서 재배되고 일단 곰팡이가 재배되면 미네랄 오일로 덮여 있습니다. 오일은 오토 클레이브에서 45 분 동안 멸균되어야하며 대략 300-330 세이백 (Saybolt)의 점도를 가져야합니다. 오일은 베벨 선단을 1 ~ 2cm 초과해야합니다.

품질 관리

각 준비 배치에서 하나 또는 두 개의 접시가 취해 져야하고 25 시간 48 시간 또는 20 ℃에서 96 시간 동안 배양해야합니다. 좋은 무균 컨트롤은 콜로니가 발생하지 않는 컨트롤입니다.

다음과 같은 알려진 또는 입증 된 대조 균주 :

사카로 마이 세스 세레 비시 애 ATCC 9763, 칸디다 알비 칸스 ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, 홍역 흰 곰팡이 ATCC 9533. 모든 경우에 양호한 성장이 기대된다..

참고 문헌

  1. 영국 실험실. 아빠 glucosado 한천. 구매 가능 : britanialab.com
  2. Neogen Laboratories 감자 덱 스트로스 한천. 구매 가능 : foodsafety.neogen.com
  3. Insumolab 연구소 감자 포도당 한천. 구입처 : insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
  5. Casas-Rincon G. 일반 균류. 1994. 베네수엘라 중앙 도서관 2 판 중앙 도서관, 도서관 판. 베네수엘라, 카라카스.
  6. Aceituno M. Pharmacopeia Usp Reference Method 2005에 따른 Eyeshadow의 미생물 품질 평가, 국가 생산 실험실의 컴팩트 파우더 유형. 약 제 화학자의 직함 자격. 산 카를로스 데 과테말라 대학교.
  7. Cuétara M. 표면 샘플 처리. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; pp. 1-12