Agar LIA (라이신 철) 기초, 준비 ​​및 사용



그 LIA 한천 (Lysine Iron)은 장내 세균 인 박테리아를 확인하는 데 사용되는 생화학 적 검사입니다. 이 매체는 Falkow의 공식에 기초하여 Edwards와 Fife에 의해 만들어졌습니다..

원래이 시험은 펩톤, 효모 추출물, 글루코오스, L- 라이신, 브로 모 크레졸 퍼플 및 증류수를 함유 한 배지였다. Edwards와 Fife는 한천, 시트르산 암모늄 구연산염과 티오 황산나트륨을 첨가했습니다..

이 시험은 기본적으로 아미노산 L- 라이신의 카르복실기와 반응 할 수있는 효소 리신 디카 르 복실 라제의 존재를 입증하는 것으로 구성됩니다. 아미노산의 탈 아미 노화는 또한 효소 라이신 데 아미나 제의 존재로 인해 발생할 수있다.

또한, 배지 조성은 일부 박테리아 속의 황화수소 생성 능력을 입증 할 수 있습니다. 마지막으로 중간에 가스의 발생 여부를 관찰하는 것도 가능합니다..

색인

  • 1 재단
    • 1.1 펩톤 및 효모 추출물
    • 1.2 포도당
    • 1.3 L- 라이신
    • 1.4 pH 지시약 (브로 모 크레졸 퍼플)
    • 1.5 시트르산 철 암모늄 및 티오 황산나트륨
  • 2 시험 통역
    • 2.1 라이신의 탈 카복실 화
    • 2.2 라이신의 Deamination
    • 2.3 황화수소 (H2S)
  • 3 결과 기록
  • 4 준비
  • 5 용도
  • 6 참고 문헌

재단

펩톤 및 효모 추출물

대부분의 배양 배지와 마찬가지로 철 리신 한천에는 세균 증식에 필요한 영양소 원천을 제공하는 성분이 들어 있습니다. 이들 성분은 펩톤 및 효모 추출물로 대표된다.

포도당

또한이 한천에는 발효 성 탄수화물 포도당이 들어 있습니다. Enterobacteriaceae 발효 포도당의 모든 박테리아.

이 단계는 효소 라이신 디카 르 복실 라제 (존재하는 경우)의 기질에 작용하는 필수 조건 인 배지를 산성화시키는 역할을하기 때문에 중요합니다..

몇몇 박테리아 속에서 포도당의 발효로 인한 가스 생산이 관찰 될 수있다.

가스는 튜브 내에 한천의 변위가있을 때 튜브의 바닥에 빈 공간을 남기거나 또는 두 개 또는 그 이상의 부분에서 배지를 파쇄 할 때 입증됩니다.

L- 라이신

일단 라이신이 탈 카복실 화되면 디아민 (cadaverine)과 이산화탄소가 형성됩니다.

탈 카르 복 실화는 코엔자임 피리독 사 인산염의 존재 하에서 발생한다. 이 반응은 되돌릴 수 없다..

PH 지시약 (브로 모 크레졸 퍼플)

pH의 모든 변화는 상이한 반응에 의해 배지에서 발생하였고, 브로 모 크레졸 퍼플 pH 지시약.

이런 의미에서 산성화가되면 매질은 황색으로 변하며, 알칼리 화가되면 원래의 자색 또는 보라색으로 되돌아갑니다.

라이신의 탈 아미 네이 팅이 효소 라이신 데 아미나 제 (lysine deaminase)의 존재에 의해 일어날 때, Proteus, Providencia 및 Morganella의 일부 종에서 전형적인 붉은 색이 표면에 형성된다.

이는 탈 이온화 과정에서 알파 - 케토 - 탄산이 형성되고 산소의 존재하에 시트르산 암모늄과 반응하여 상기 언급 된 색상을 유발하기 때문입니다.

시트르산 암모늄과 티오 황산나트륨

한편, 황화수소를 생성하는 박테리아는 황산 나트륨 (sodium source)과 염화철 (ferric ammonium citrate)의 존재에 의해 증명 될 것인데, 이것은 H2S.

티오 설페이트 환원 효소를 보유하는 박테리아는 존재하는 티오 황산나트륨을 환원 시켜서 아황산염 및 황화수소를 생성시키는 작용을한다 (H2S).

후자는 무색의 가스이지만, 철염과 반응 할 때 불용성 화합물 인 금속 철 황화물 (가시 흑색의 침전물).

그러나 H 형성 능력2S를 생산할 수있는 일부 리신 디카 르 복실 라 아제 박테리아가2S는 블랙 침전물을 형성하지 않을 것인데, 이는 매체의 산성도가 간섭하기 때문입니다. 따라서 철분을 함유 한 다른 방법으로 검사하는 것이 좋습니다.

시험 통역

라이신의 탈 카복실 화

24 시간 동안 배양이 끝난 후 튜브를 읽어야합니다. 그렇지 않으면 반응을 오판 할 위험이 있으며, 위음성이보고됩니다.

첫 번째 반응은 포도당의 발효이므로 10-12 시간 후에 모든 튜브가 노랗게 변할 것임을 기억해야합니다.

잠복기 (24 시간)가 끝날 때 보라색 또는 자주색 표면을 가진 노란색 배경이 관찰되면 반응은 음성입니다. 표면의 자주색은 펩톤의 사용에 의한 배지의 알칼리화에 해당한다..

긍정적 인 반응은 튜브의 바닥과 표면이 완전히 보라색, 즉 원래의 색으로 되돌아가는 반응입니다.

따라서 시험의 양성 여부를 결정하는 사람은 매체의 바닥 또는 바닥입니다. 색상에 의문이 생기면 비 접종 LIA 튜브와 비교할 수 있습니다.

라이신의 Deamination

라이신의 탈 아민을 나타내는 튜브는 적갈색 표면과 황색 배경 (산) 또는 전체 적갈색 튜브를 갖습니다..

이 반응은 라이신의 탈 카복실 화에 대해 음성으로 해석되지만 리신의 탈 아미 노화에 대해서는 양성으로 해석된다.

이 반응은 경사로 정의되고 해석됩니다..

황화수소 (H2S)

양성 반응은 매질의 전부 또는 일부에서 흑색 침전물의 출현에 의해 관찰된다. 일반적으로 사면 경계와 기저부 사이.

침전물이 튜브 전체에 발생하면 매체에서 발생하는 다른 반응을 나타내지 않을 것입니다.

결과 기록

테스트를 해석 할 때 결과는 다음과 같이 기록됩니다.

먼저 베벨을 읽은 다음 바닥 또는 타코를 읽은 다음 H를 생산합니다.2S, 그리고 마지막으로 가스 생산.

예 : K / A + (-). 이것은 다음을 의미합니다.

  • K : 알칼리성 베젤 (보라색)
  • A : 산성 (황색) 배경, 즉 음성 탈 카르 복 실화 반응 및 음성 탈 아민.
  • +: 황화수소의 생산
  • (-) : 가스가 없을 때.

준비

라이신 한천 탈수 된 철 35g을 칭량하고 증류수 1 리터에 녹인다..

한천이 완전히 녹을 때까지 가열하십시오. 그래서 자주 저어 주면서 끓으십시오. 목화 뚜껑이 달린 13/100 시험관에 배지 4 ml를 분배하십시오.

121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 소독하십시오. 오토 클레이브에서 꺼내고 깊은 바닥과 짧은 경사가있는 방식으로 기울어 진 자세로 쉴 수 있도록하십시오.

냉장고에 2-8 ° C에서 저장하십시오. 박테리아 균주를 심기 전에 성질을 유지하도록하십시오..

탈수 된 배지의 색은 베이지 색이며, 배지는 적색을 띤 보라색을 띤다..

준비된 배지의 최종 pH는 6.7 ± 0.2이다.

배지는 pH가 5.2 이하인 황색으로 변하고, pH 6.5에서는 보라색으로 변한다.

용도

이 시험은 다른 생화학 검사와 함께 Enterobacteriaceae 계통의 세균을 확인하는 데 사용됩니다..

배지를 직선 루프 또는 바늘로 파종하고, 튜브의 바닥에 하나 또는 두 개의 펀치를 형성시킨 다음, 배지 표면을 지그재그 형으로 만든다.

그것은 aerobiosis에서 35-37 ° C에서 24 시간 동안 배양됩니다. 필요한 경우 24 시간 더 배양합니다..

그것은 네거티브 시트로 박터 유당 종을 살모넬라 균 sp.

참고 문헌

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  4. 영국 실험실. 라이신 철분 한천. 구매 가능 : britanialab.com
  5. BD 실험실 BBL 라이신 아이언 한천 한천. 구매 가능 지역 : bd.com
  6. Valtek Laboratories 중간 L.I.A. 구매 가능 지역 : andinamedica.com