Agar M.R.S 기초, 준비 ​​및 사용



그 한천 M.R.S. 은 선택적 유산균 배양액으로 유산균, 특히 유산균 (Lactobacillus)의 분리 및 계수에 사용됩니다. 이 한천은 Man, Rogosa 및 Sharpe에 의해 1960 년에 만들어 졌는데 중간에 같은 이름이 붙었지만 그 복잡성 때문에 M.R.S라는 약어가 자주 사용됩니다..

그것은 proteose 펩톤, 고기 추출물, 효모 추출물, 글루코오스, 소르 비탄 모노 올레 에이트, 칼륨, 인산 나트륨, 아세트산 암모늄, 시트르산, 황산 마그네슘, 황산 망간 및 한천으로 구성된다.

이 조성물은 대변, 질 분비물, 구강 검체 및 모유뿐만 아니라 유제품 및 육류 식품과 같은 임상 시료로부터 젖산균의 적절한 발달을 가능하게합니다..

유산균은 병리학 적 과정에 거의 관여하지 않기 때문에 임상 실험실에서는 일상적으로 사용되지 않습니다. 그러나 M.R.S 한천의 사용은 식품 미생물학 분야에서 더 빈번하다..

다른 한편,이 매체는 일부 연구 센터에서 사용되는데 그 목적은 젖산균 연구입니다.

색인

  • 1 재단
  • 2 준비
  • 3 용도
    • 3.1 식민지의 특성
    • 3.2 유산균 분리
    • 3.3 유산균 측정
    • 3.4 연구 수준
  • 4 품질 관리
  • 5 참고

재단

한천 남자, Rogosa 및 Sharpe는 아주 복잡한 구성을 가지고 있습니다. 각 구성 요소가 충족시키는 기능을 분해함으로써 기초를 설명 할 수 있습니다..

Proteose peptone, 고기 추출물, 효모 추출물 및 포도당은 세균 증식에 필요한 탄소, 질소, 비타민 및 미네랄의 공급원이되는 영양소입니다. 또한 포도당은 대부분의 배지에서 사용되는 보편적 인 에너지 원입니다.

또한, 유산균의 성장을 촉진하기 위해서는 유산균과 관련 세균의 대사에 불가결 보조 인자 (양이온)의 존재가 필요하다; 이들 화합물은 나트륨, 마그네슘 및 망간 염.

마찬가지로, 소르 비탄 모노 올 레이트 또는 폴리 소르 베이트 80은 영양소로 흡수 될 때 중요한 지방산의 원천입니다.

또한, 소르 비탄 모노 올 레이트 및 암모늄 시트 레이트는이 한천의 선택적 특성을 제공하는 동반 식물상, 특히 그람 음성 박테리아의 발생을 억제함으로써 작용한다.

마지막으로, 한천은 한천 배지에 견고한 일관성을 부여합니다..

Man Rogosa Sharpe 한천의 다른 변종이 있습니다. 그 중 하나는 시스테인 (M.R.S.c)으로 보충 된 것이고, 다른 미생물 중에서도 비피더스 균의 분리에 매우 유용합니다. 또한, 특히 유제품 비피더스 균의 선택 횟수를 들어, 네오 마이신, paromomycin, 날리 딕스 산 및 염화 리튬으로 보충 MRS 배지가.

준비

탈수 된 배지 68.25g을 칭량하고 증류수 1L에 용해시킨다. 5 분 동안 기다리십시오. 전체를 녹이기 위해서는 빈번하게 저어주는 열원을 가져오고 1 ~ 2 분 동안 끓여주십시오. 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 소독하십시오..

고압 솥을 떠날 때 몇 분 정도 기다려야하며 멸균 페트리 접시.

접시를 고형화하고 뒤집을 수 있도록하며, 칠판에 주문하고 사용하기 전까지 냉장고에 보관하십시오. 플레이트를 사용하기 전에 플레이트가 상온이되도록하십시오..

배지의 pH는 6.4 ± 0.2이어야한다. 일부 상업 주택은 5.5에서 5.9 사이의 pH를 권장합니다..

탈수 된 배지는 베이지 색이며 암색 호박색입니다..

탈수 된 배지와 준비된 판 모두 2 ~ 8 ° C에서 보관해야합니다.

용도

한천 플레이트 M.R.S. 그들은 표면에 뿌려 질 수 있습니다 (피로 또는 Drigalski의 주걱으로). 그것은 또한 깊이 뿌려 질 수 있습니다. 플레이트는 37 ° C에서 미 호기성 (4 % O2 및 5-10 %의 일산화탄소2) 24 ~ 72 시간 동안.

파종 방법은 목적 (격리 또는 계수)에 따라 선택됩니다..

식민지의 특성

락토 바실러스 (Lactobacillus)의 추정 식민지는 희끄무레하게 자라고이 한천에 점액 또는 크림 같은 모양을합니다. 그런 다음 그들은.

유산균 분리

이를 위해 표면에 심기가 사용됩니다. 식재 될 샘플에는 이전 절차가 필요합니다.. 

모유 샘플의 경우 지방층을 제거하기 위해 샘플 1ml를 14,000rpm에서 10 분간 원심 분리하는 것이 좋습니다. 900 μl를 버리고 남은 100 μl에서 침전물을 정지시키고 M.R.S.에 부었다. 다음 그것은 Drigalski의 주걱으로 균등하게 분배되어야합니다.

대변 ​​샘플의 경우, 1g의 대변을 칭량하고 1/10 희석에 상응하는 0.1 % 멸균 된 펩톤 물 9ml에 균질화한다. 그런 다음 최종 희석이 10이 될 때까지 단계 희석을합니다.-4.

최종적으로 100 μl의 희석액 10을 취합니다-2, 10-3 및 10-4 각각의 희석액을 MRS 한천에 뿌리고, Drigalski 주걱으로 균일하게 분배한다.

유산균 측정

이 경우 시드는 깊이로 이루어집니다..

모유 샘플을 얻으려면 1 mL를 취해 살균 원추형 플라스틱 튜브에 넣으십시오. MRS 한천을 약 40 ° C의 온도에서 25 mL의 최종 부피까지 첨가하여 균질 한 혼합물을 얻는다. 이어서, 균일 한 방식으로 멸균 페트리 접시에 붓고, 중합 될 때까지 정치시킨다..

위에 설명한대로 대변 샘플을 희석하여 만듭니다. 각 희석액 1 mL를 취해 살균 원뿔형 플라스틱 튜브에 넣으십시오. 용융 된 MRS 한천을 25 mL.

각 희석액의 혼합물을 무균 페트리 접시에 균일하게 부어 넣는다. 마지막으로 그것이 중합 될 때까지 기다리십시오..

연구 수준

매일 젖산균에 대한 연구가 더욱 흥미 진진합니다. 특히 연구자들은 유제품 생산에서의 표준화를위한 발효제로서의 새로운 균주와 그 잠재력을 알고 자한다..

이러한 의미에서 Alvarado et al. (2007)은 M.R.S. 한천을 사용했다. 장인이 베네수엘라 훈제 한 치즈에 들어있는 젖산균을 분리, 확인 및 특성화 한 연구를 수행했습니다..

치즈 그들은 코커스 속 유산균의 박테리아의 존재를 발견하고, 분리 된 혼합물을 저온 살균 우유로부터 치즈의 제조에서 출발 균주로서 적합 결론.

반면에, Sánchez et al. (2017)은 M.R.S agar를 사용했다. 돼지 새끼의 소화관에서 젖산균의 존재를 조사하여 건강한 새끼 돼지의 생산성을 증가시키는 천연 프로바이오틱스로 사용.

이 매체를 이용하여 그들은 4 종을 분리 할 수있었습니다 : Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae 및 Pediococcus pentosaceus.

마찬가지로 Báez et al. (2019)은 M.R.S. 한천을 사용했다. 모유와 유아의 분뇨에서 probiotic 잠재력을 가진 유산균 (BAL)과 비피더스 균을 평가.

그들은 11 개의 BAL과 3 개의 비피더스 균 sp 모유와 8 개의 BAL과 2 개의 비피더스 균 sp. 의자에 모두는 probiotic 활동을 가진 박테리아로 그들을 인증하는 특정 매개 변수를 만났다..

저자들은 모유와 독점적 모유 수 유아의 대변 모두가 프로 바이오 틱 박테리아의 천연 공급원으로 작용한다고 결론 지었다.

품질 관리

M.R.S.의 품질 평가 제어 균주는 다음과 같이 사용될 수있다 :

락토 바실러스 fermentum ATCC 9338, 락토 바실러스 카제이 ATCC 393, 비피더 박테 리움 비피 엄 ATCC 11863, 락토 바실러스 플랜 텀 MKTA 8014, 락토 바실러스 락키스 MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, 대장균 (Escherichia coli) 및 바실러스 세레 우스 (Bacillus cereus).

기대되는 결과는 처음 6 마리의 박테리아가 만족할만한 성장을하는 반면, 대장균 및 바실러스 세레 우스 전체적으로 억제되어야한다..

참고 문헌

  1. 알바 C, Z 차콘, Otoniel J, B 게레 로페즈 G. 분리, 식별 및 치즈 베네수엘라 장인 훈제 디노의 유산균 특성화. 시동 재배로 사용. 과학자 (Maracaibo) 2007; 17 (3) : 301-308. 구입처 : scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro 돼지의 소화관에서 젖산 박테리아 분리. 수사. 수의사. 페루 2017; 28 (3) : 730-736. 구입처 : scielo.org.
  3. 바에즈 E, 곤잘레스 G, 에르난데스 G, 로페즈 E, 졸업생의 학위 마을 아세 베도, 미란다 2017 년 학위 작업에서 모유와 유아 분변에서 프로 바이오 틱 잠재력을 가진 유산균과 비피더스 균의 메가 M. 평가 생물 분석 베네수엘라 카라 보보 대학교.
  4. 영국 실험실 M.R.S 한천. 구매 가능 : britanialab.com
  5. 위키 피 디아 공헌자. MRS 한천 위키 백과, 무료 백과 사전. 2018 년 1 월 10 일 19시 44 분 UTC. 이용 가능 : wikipedia.org 액세스 : 2019 년 2 월 17 일.
  6. 로이 D. 미디어 유제품의 bifidobacteria 격리 및 열거. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3) : 167-82.