몫:
한천 EMB 기초, 준비 및 사용
그 EMB 한천 주로 Enterobacteriaceae 계통의 그람 음성 간균 및 기타 요구되지 않는 그람 음성 간균의 분리에 사용되는 선택적 및 차별적 인 고체 배양 배지이다. Eosin-methylene blue를 의미하는 약어 EAM으로도 알려져 있습니다..
이 배지는 1916 년 홀트 해리스 (Holt-Harris)와 티그 (Teague)가 만들었습니다. 펩톤, 유당, 수크로오스, 인산 디 칼륨, 한천, 에오신, 메틸렌 블루 및 물이 포함되어 있습니다. MacConkey 한천과 매우 유사합니다. 특히 Levine으로 변형 된 EMB 한천을 사용하는 경우에는 수크로오스가 포함되지 않습니다.
사실, 각 실험실은 생화학 적으로 다르지만 동일한 기능을 수행하기 때문에 어느 것이 든 작동 하는지를 결정합니다.
그것은 심지어 Proteus 속의 무리한 생산 측면에서 고전적인 MacConkey 한천과 동일한 단점을 나타냅니다. 따라서이 현상을 피하기 위해 한천 농도를 최대 5 %.
색인
- 1 재단
- 1.1 선택적
- 1.2 차동
- 2 준비
- 3 용도
- 4 품질 관리
- 5 최종 고려 사항
- 6 참고 문헌
재단
선택적
그것은 대부분의 그람 양성 박테리아의 성장 요구 일부 그람 음성균 방지 억제제로서 작용 anilinic 염료 (에오신 메틸렌 블루)를 포함하고 있기 때문에 EMB 한천 미묘 선택성.
그러나이 한천은 일부 그람 양성균이 억제 물질의 존재에 저항 할 수 있고 작은 무색의 점액 형 콜로니로 자랄 수 있다는 단점이 있습니다. Enterococcus faecalis 일부 포도상 구균.
당신은 또한 특정 효모를 자랄 수 있습니다. 칸디다 알비 칸 복합체, 그것은 아주 작은 분홍색 식민지를 줄 것입니다. 표본을 심도에 따라 뿌리면이 효모로부터 추기 포자조차도 개발 될 수 있습니다.
차동
또한, EMB 한천는 차동 매체 함께 이들 염료 (에오신 메틸렌 블루) 산성 pH의 침전물을 형성하는 성질을 갖기 때문에, 따라서 그들은 그의 생산의 지표로서 기능, 또한.
따라서 유당이나 자당 박테리아를 약하게 발효 시키면 24 ~ 48 시간 안에 보라색 콜로니가 생성됩니다. 예를 들어, 클레시 텔라 (Klebsiella), 엔테로 박터 (Enterobacter) 및 세라 티아 (Serratia).
락토오스를 강하게 발효시키는 박테리아 대장균, 또는 자당 Yersinia enterocolitica o 프로 테우스 펜 네리, 녹색의 흑색 침전물을 형성하여 이들 종에서 금속 광택을 특징으로한다.
EMB levine 배지를 사용하면 (sucrose없이), Yersinia enterocolitica 및 프로 테우스 펜 네리 그들은 투명한 식민지를 생산할 것이다..
박테리아는 락토오스 또는 수크로오스가 세균의 증식을 위해 아미노산 및 질소를 제공 펩톤의 존재에 의해 공급되는 발효, 투명 콜로니를 생성하지 않는다. 예를 들어 살모넬라 (Salmonella) 및 시겔 라 (Shigella).
유당 또는 자당 발효기, 그러나 그들의 세포벽에 메틸렌 블루를 고정 속성을 가지고 있지 않지만, 된 Acinetobacter 라벤더 블루 식민지를 가질 수 속을주의하는 것이 중요하다. 이것은 또한 다른 산화 박테리아에서도 발생할 수 있습니다..
준비
원래 탈수 된 매체는 밝은 베이지 색입니다..
이 배양 배지를 준비하기 위해 탈수 된 배지 36g을 칭량하고 1 리터의 증류수.
나머지 5 분 동안 혼합물을 방치 한 후, 비올라를 열원으로 가져 와서 비등하여 완전히 용해 될 때까지 격렬히 섞는다..
이어서, 121 ℃에서 15 분간 오토 클레이브를 사용하여 용균 배양액을 멸균해야한다.
시간이 끝나면 오토 클레이브에서 꺼내어 잠시 쉬어 야합니다. 그런 다음 각 멸균 페트리 접시에서 한천 15-20 ml 사이의 뜨거운 (45-50 ° C)조차 제공됩니다. 매체는 파란색 리트머스 여야합니다..
서빙 후에 접시는 한천이 조금 식을 때까지 약간 노출 된 상태로 남아 있습니다. 그런 다음 그들은 겉으로 덮여 완전히 굳혀지게됩니다. 나중에, 그들은 반전 된 플라크 홀더로 주문하여 냉장고에 보관할 때까지 보관합니다 (8 ° C)..
이 과정은 바람직하게는 층류 후드 또는 분젠 버너 앞에서 수행되어 오염을 피한다.
각 상업용 주택에는 배지를 준비하기 위해 계량해야 할 금액이 명시되어 있음을 명심해야합니다.
배지의 최종 pH는 7.2 ± 0.2이어야한다.
용도
이 매체는 이러한 세균이 배지에서 잘 자라는 장내 가족에 속하는 것으로 부담스럽지 그람 음성 세균의 존재가 의심되는 경우, 특히, 소변과 대변이나 임상 시료의 종류를 심을 사용.
시겔 라 (Shigella) 및 살모넬라 (Salmonella) 속의 병원균은 무색 또는 약간 호박색의 콜로니로 구별된다.
Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter와 같은 다른 비 발효 유당균도 자랍니다..
마찬가지로,이 배지는 대장균 군의 결정에 대한 완전한 확인 단계에 이상적이기 때문에 식량과 물의 미생물 분석에 매우 유용하다. 즉, 대장균 군의 존재를 뒷받침하는 데 이상적이다. 대장균 탁한 EC broths, 가장 가능성있는 번호 기술 (NMP).
품질 관리
새로 배양 된 배양액이 잘 작동하는지 확인하기 위해 대조 균주를 심어 식민지의 특성을 관찰하고 예상대로 배양 할 수 있습니다.
이를 위해 ATCC 균주 또는 대장균, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, 살모넬라 티피 무리 움, 이염 플렉 스 네리, Pseudomonas aeruginosa 일부 그램 양성 박테리아는 S. aureus.
그것은 예상된다. 대장균 녹색의 금속 광택을 가진 잘 발달 된 청록색의 흑색 집락을 생성하십시오. 만큼, Enterobacter aerogenes 및 Klebsiella sp 그들은 잘 발달 된 점액 식민지를 푸르스름하게 만들어야한다..
그 부분을 위해, 살모넬라 균 티피 머륨 및 이염 플렉 스 네리, 그들은 무색이거나 약간 황색을 띠는 커다란 콜로니를 형성해야한다..
마침내 장르 Pseudomonas aeruginosa 불규칙한 크기의 무색 콜로니로 자라는 반면, 그람 양성균은 아주 작은 콜로니와 함께 완전히 억제되거나 아껴서는 안됩니다.
최종 고려 사항
때로는 멸균으로 메틸렌 블루가 오렌지색 배지를 관찰하여 감소합니다. 메틸렌 블루가 산화되고 퍼플 색이 회복되도록하려면 색이 회복 될 때까지 부드럽게 혼합해야합니다.
또한, 살균 후 염료를 침전시킬 수 있으므로 페트리 접시를 제공하기 전에 잘 섞여야합니다.
참고 문헌
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B 및 Velázquez O. 2009. 식품의 미생물 분석 기술. 2nd ed. UNAM 화학 학부. 멕시코.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C.의 균주의 특성화 및 분포 대장균 페루의 가금류 농장에서 생산 된 치킨 브로일러의 잠재적 병원성 균주 수사. 수의사. 페루 2012 23 (2) : 209-219. 구입처 : scielo.org.
- Laboratories Conda S.A. Eosin 한천 및 메틸렌 블루. 구매 가능 : condalab.com
- 영국 실험실. Levine E.M.B (Eosin 및 Methylene Blue 사용) 2011. 이용 가능 : britanialab.com
- BD 실험실 BD EMB 한천 (Eosin Methylene Blue Agar), 수정 됨. 2013 년에 이용할 수 있습니다. bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 학적 진단. (5 판). 아르헨티나, 편집 Panamericana S.A..
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 아르헨티나 Panamericana S.A 사설