Agar에는 표준 기초, 준비 ​​및 사용법이 있습니다.



그 표준 계정 한천 는 다른 식품들 중에서 음용수, 폐수, 우유 음료의 샘플에 존재하는 호기성 미생물 적재의 정량을 위해 고안된 고체의 비 선택적 배양 배지입니다. 이 배지는 English Plate Count Agar라는 약자로 PCA 한천으로도 알려져 있습니다. 그것은 1953 년 Buchbinder, Baris 및 Goldstein에 의해 창안되었습니다..

표준 한천 배지는 효모 추출물, 트립신, 포도당, 한천 및 증류수로 구성됩니다. 이 제형은 현재의 호기성 미생물 부하의 발달을 허용하는 기본적인 영양 요소를 포함하며 요구하지 않습니다.

배지가 억제제를 함유하지 않기 때문에, 박테리아는 제한없이 발전 할 수 있으므로 일반적인 식민지 수에 이상적입니다. 그러나, 플레이트 정량화 기술은 존재하는 모든 박테리아를 검출하지 못할 것이지만, 표준 파종 된 한천이받는 환경 조건 하에서 성장할 수있는 것만을 검출 할 것이다..

이러한 의미에서 플레이트 정량화 기술은 일반적으로 호기성 중온 성 박테리아의 양, 즉 25 ℃와 40 ℃ 사이의 온도에서 발생하는 박테리아의 양을 37 ℃에서 최적 성장 온도로 결정하고자합니다.

이 박테리아 그룹은 사람에게 병원성 박테리아의 대부분이 있기 때문에 매우 중요합니다..

때로는 음식에 존재하는 마크로 박테리아의 양을 정량화하는 것이 흥미로울 수 있음에 유의해야합니다. 이 박테리아는 저온에서 발생하는 박테리아입니다 (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

마찬가지로, 50 ℃ ~ 80 ℃ 이상의 온도 범위에서 발생하는 고온 성 박테리아는 통조림과 같은 특정 유형의 식품에서 중요 할 수 있습니다.

미생물 정량은 그램 또는 시료 밀리리터 당 콜로니 형성 단위 (CFU)로 표현됩니다.

색인

  • 1 재단
  • 2 준비
    • 2.1 접시 붓기 기술
    • 2.2 표면 재배용
  • 3 사용
    • 3.1 플레이트 붓기 기술 (깊이로 시드)
    • 3.2 표면에 뿌려지는 기술
  • 4 품질 관리
  • 5 제한 사항
  • 6 참고 문헌

재단

표준 계수 배지는 효모 추출물, tripheine 및 포도당이 좋은 미생물 발달에 필요한 영양소를 제공하기 때문에 비 요구성 호기성 박테리아를 만족스럽게 개발할 수 있도록 설계되었습니다.

반면에, 배지는 투명한 색과 투명한 외관을 가지고 있기 때문에 심 파종 (접시에 붓는) 방법으로 개발 된 식민지를 표시하는 데 이상적입니다..

Drigalski의 주걱으로 표면에 파종하는 방법으로 식민지를 계산하는 것도 가능합니다..

미생물 적재량이 많은 경우 CFU를 계산하기 위해 연구중인 샘플의 십진법 희석을 실시해야합니다.

이 매체는 호기성 중기 생물의 계산을 위해 미국 공중 보건 협회 (APHA)에서 권장하는 사항입니다.

준비

탈수 된 매질 23.5g을 계량하여 증류수 1L에 녹인다. 혼합물을 완전히 녹이기 위해서는 끓을 때까지 자주 가열해야합니다. 하위 추종 단계는 사용될 시딩 기술에 따라 달라집니다.

플레이트 부어 기술

시험관에 12 ~ 15 ml를 분배하여 분배하십시오. 이어서, 121 ℃에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 멸균한다. 블록 형태로 수직으로 응고하도록 허용합니다. 사용하기 전까지 냉장고에 보관하십시오..

그것이 사용될 때 신호를 녹여 라. 일단 녹 으면 시료가 준비되는 동안 44-47 ° C의 수조에 보관하십시오.

표면에 심기 위해

121 ° C에서 고압 멸균기에서 배지를 멸균 한 다음 멸균 페트리 접시에 20 ㎖를 분배합니다. 사용하기 전까지 고형화, 반전 및 냉장고 보관.

사용하기 전에 접시를 부드럽게하십시오. 배지의 pH는 7.0 ± 0.2이어야한다..

사용

한천 표준 수는 물과 음식의 미생물 분석 동안 호기성 중온도 계수 기술에 사용됩니다. 연구 대상 샘플의 위생 품질을 결정하기 때문에 호기성 중위 원소의 세기 계산이 필요합니다..

이 기술의 응용 (이 매체를 사용)은 격리 된 콜로니의 정량화를 육안으로 시각화 할 수 있습니다.

플라크 쏟아 내기 기술 (깊이로 뿌려 짐)

-절차

이 기술은 다음과 같이 구성됩니다.

1) 존재하는 박테리아를 재분배하기 위해 시료를 균질화한다..

2) 초기 현탁액은 멸균 바이알 또는 백에서 희석액 90 mL 중 10 g 또는 10 mL의 비율을 존중한다.-1).

3) 초기 현탁액에서 샘플의 유형에 따라 적절한 십진수 희석이 이루어집니다. 예 : (10-2, 10-3, 10-4). 희석은 펩톤 물 또는 인산염 완충액으로한다.

이를 위해 초기 현탁액 1 ml를 취하여 희석제 9 ml에 넣고 필요하면 희석액을 계속하여 희석액 1 ml를 취합니다.-2 등등.

4) 각 희석액 1ml를 취하여 멸균 된 페트리 접시에 넣는다..

5) 각 플레이트에 미리 녹인 표준 번식 한천 12 ~ 15 ml를 넣고 44 - 47 ° C.

6) 시료를 한천에 균일하게 분산시키고 응고시킬 수 있도록 원활하게 회전 운동을한다..

7) 플레이트를 뒤집어 37 ° C에서 24 시간 ~ 48 시간 동안 에어로빅 (autobiosis).

8) 시간이 끝나면 판을 검사하고 그것을 허용하는 희석에서 식민지를 계산합니다. 30 ~ 300CFU 사이의 판 수를 계산하기 위해 선택됩니다.

계산은 수동으로 수행하거나 식민지 카운터 장비를 사용할 수 있습니다..

표본 1ml 당 허용되는 값은 국가 표준에 따라 달라질 수 있습니다.

-UFC의 계산

일반적인 계산은 다음 공식을 사용하여 수행됩니다.

결과를 1 자리 또는 2 자리로 표현하고 적절한 기준 10을 곱하십시오. 예 : 결과가 16.545 인 경우 세 번째 숫자를 기준으로 17.000으로 반올림되며 다음과 같이 표시됩니다. 1.7 x 104. 결과가 16,436이면 16,000으로 반올림되고 1.6 x 10으로 표현됩니다.4.

표면에 심어진 기술

-절차

-액체 인 경우 직접 시료 0.1ml를 접종하고 초기 현탁액 10-1 또는 연속 희석액 10-2, 10-3 표준 계정 한천 플레이트의 중간에.

-Drigalski 주걱 또는 L 자형 유리 막대를 사용하여 시료를 고르게 분배하십시오. 10 분 동안 그대로 두십시오..

-37 ° C에서 24 시간에서 48 시간 동안 플레이트를 뒤집어서 에어로 바이오 시스에서 배양하십시오..

-식민지 계산을 계속하고, 20-250 CFU 범위의 플레이트를 선택하십시오.

-UFC의 계산

계산을 위해, 역수 인 희석 계수가 적용됩니다. 이 숫자는 2 자리 유효 숫자로 반올림되며 (세 번째 숫자에 따라 반올림 됨) 기본 10 진수로 표시됩니다. 예를 들어, 희석없이 샘플에서 224 CFU를 계산하면 (10-1), 22 x 10이보고됩니다1  UFC, 그러나 수치가 225라면 23x101 UFC.

이제 희석 10에서 199 CFU를 계산하면-3, 20 x 10이보고됩니다.4 UFC, 그러나 동일한 희석에서 153 CFU를 계산하면 15 x 10이보고 될 것입니다4 UFC.

품질 관리

표준 계수 배지는 다음과 같은 알려진 인증 된 균주를 사용하여 평가할 수 있습니다. 대장균 ATCC 8739, 포도상 구균 (Staphylococcus aureus) ATCC 6538, 바실러스 서브 틸리 스 ATCC 6633, 락토 바실러스 fermentum ATCC 9338, 표피 포도상 구균 ATCC 12228, 이염 플렉 스 네리 ATCC 12022.

배양 배지가 최적 조건에 있다면, 모든 경우에 만족할만한 성장이 기대됩니다. L. fermentum 규칙적인 성능을 가질 수있는.

배지의 무균 상태를 평가하기 위해 각 준비된 배치 (접종하지 않음) 중 하나 또는 두 개의 플레이트를 24 시간 동안 aerobiosis에서 37 ℃에서 배양해야합니다. 이 시간이 끝나면 매체의 성장이나 색 변화가 관찰되지 않아야합니다..

제한 사항

-한천을 한 번 이상 녹이지 마십시오..

-준비된 배지는 냉장고에 보관되어 빛으로부터 보호되는 한 최대 3 개월간 보관할 수 있습니다.

-이 미생물은 까다로운 미생물이나 혐기성 균에 적합하지 않다..

참고 문헌

  1. 국가 식품 의약 기술 행정국 (ANMAT). 식품의 미생물 분석, 공식 분석 방법론, 지표 미생물. 2014 년 3 권. 사용 가능 : anmat.gov.ar
  2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. 판 백작 한천. 이용 가능 : http://f-soria.es
  3. 실험실 Conda Pronadisa. APHA 및 ISO 4833에 따른 표준 방법 (PCA) 용 한천. 사용 가능 여부 : condalab.com
  4. 영국 실험실. 한천 접시에 세고. 구매 가능 : britanialab.com
  5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B 및 Velázquez O. 2009. 식품의 미생물 분석 기술. 2nd ed. UNAM 화학 학부. 멕시코 구입 가능 : depa.fquim.unam