몫:
Simmons 구연산염 한천 기초, 준비 및 사용
그 Simmons Citrate 한천 미생물, 특히 그람 음성균을 확인하기위한 생화학 적 시험으로 사용되는 고체 배지입니다. 원래 매체는 1923 년 Koser에 의해 만들어졌습니다..
Koser 's Citrate 배지는 인산 나트륨, 인산 암모늄, 인산 일 칼륨, 황산 마그네슘 및 시트르산 나트륨을 함유 한 육즙으로 구성됩니다..
알 수 있듯이, 배지의 유일한 탄소원은 시트르산이며, 질소는 인산 암모늄이며, 단백질과 탄수화물은 이들 성분의 공급원으로 생략되며, 다른 배지에 일반적으로 존재합니다..
따라서 그 배지에 접종 된 박테리아는 구연산 탄소를 취할 수있는 경우에만 재생산 할 수 있습니다. 시험은 배지에 탁도가있는 경우 양성 이었지만 비특이적 탁도가 발생할 수 있다는 단점이있었습니다.
이 문제는 Simmons가 Agar와 bromothymol blue를 Koser의 원래 공식에 첨가함으로써 해결되었습니다. 원칙은 동일하지만 다르게 해석됩니다..
색인
- 1 재단
- 1.1 시드 모드
- 1.2 해설
- 2 준비
- 3 사용
- 4 최종 고려 사항
- 4.1 접종 물
- 4.2 시드
- 4.3 색 농도
- 5 참고
재단
일부 박테리아는 다른 기질을 사용하여 에너지를 얻을 필요가있는 발효 또는 유산 생산없이 생존 할 수 있습니다. 이 시험에서 제공되는 유일한 탄소 공급원은 구연산염.
이러한 조건 하에서 생존 할 수있는 박테리아는 전통적인 경로의 대안을 통해 신속하게 트리 카르 복실 산 사이클 또는 시트르산 발효 사이클을 사용하여 시트르산을 대사합니다.
세균에 의한 시트르산의 이화 작용은 코엔자임 A의 개입없이 효소 기작을 포함한다.이 효소는 시트르산 (시트르산 옥살로 아세테이트 - 리아제) 또는 시트르산 데스 모라 제로 알려져있다. 반응은 2가 양이온의 존재를 필요로하는데,이 경우에는 마그네슘.
이 반응은 옥살로 아세테이트와 피루 베이트를 생성하며, 이는 질소원의 사용에 의해 형성된 알칼리성 pH의 중간에 유기산을 발생시킨다. 이 유기산은 탄산염과 중탄산염을 생성하는 탄소원으로 사용되어 더욱 매질을 알칼리화합니다.
파종 모드
시몬즈 시트르산 배지는 스트레이트 루프 또는 바늘을 사용하여 어류 꼬리에 가볍게 접종하고 35-37 ℃에서 24 시간 동안 배양해야한다. 마지막 시간에 결과가 관찰됩니다..
씨앗 뿌리기는 한천 표면에서만 이루어집니다. 펑크를 내지 마라..
통역
배지가 원래 색 (녹색)이고 가시적 인 성장이 없다면 시험은 음성이지만, 배지가 푸른 색으로 변하면 알칼리성 제품이 있음을 나타내며 pH 지시약에 의해 검출됩니다. 이 경우 테스트는 긍정적입니다..
이것은 박테리아가 시트르산의 탄소를 사용하면 암모니아를 방출하는 인산 암모늄의 질소를 취할 수 있기 때문에 일어납니다..
반면에 배지에서 박테리아의 성장이 관찰되었지만 색의 변화가 없다면 시험은 양성으로 간주되어야한다. 성장이 있다면 박테리아가 구연산염을 탄소원으로 사용할 수 있었고, 현재 pH 변화가 없다 (때로는 걸릴 수도 있음).
최종 색상의 해석에 의문점이있는 경우, 그것은 uninoculated 구연산의 튜브와 비교할 수 있습니다.
준비
1 리터의 물에 24.2 gr의 탈수 된 매체를 잰다. 혼합하고 5 분 정도 기다리십시오. 1 ~ 2 분 동안 가열하여 매체를 녹인 후 자주 저어 준다..
121 ℃에서 15 분간 시험관과 오토 클레이브에 4ml 씩 담는다. 오토 클레이브를 떠날 때, 한천이 작은 쐐기 모양 또는 바닥 및 더 경사가있는 홈 모양의 형태로 응고하는 방식으로 지지부의 도움으로 기울입니다.
구연산염 배지의 최종 pH는 6.9 (녹색)이다. 이 매체는 pH 변화에 매우 민감합니다..
pH 6 이하에서는 배지가 황색으로 변합니다. 이 색은 박테리아 검사에서 관찰되지 않습니다..
그리고 pH 7.6 이상에서는 강렬한 프로이센 블루로 바뀝니다..
사용
Simmons citrate 한천은 특정 미생물, 특히 Enterobacteriaceae 계통에 속하는 세균 및 기타 포도당 비 발효 간균의 확인에 사용됩니다..
최종 고려 사항
Simmons citrate medium은 특정 오류가 발생하면 위양성을 얻을 수 있기 때문에 매우 섬세한 검사입니다.
취해야 할주의 사항은 다음과 같습니다.
접종 물
매우 두꺼운 또는 적재 된 박테리아 접종 물을 만들지 마십시오. 왜냐하면 심는 곳에서 매끄러운 노란색을 발달시켜 나머지 배지에 영향을 미치지 않기 때문에 성장이 있다고 믿을 수 있습니다. 동일한 것이 시험의 양성을 의미하지는 않습니다..
마찬가지로, 두꺼운 접종 물은 거짓 양성을 일으킬 수 있는데, 이는 죽어가는 박테리아의 세포벽에있는 미리 형성된 유기 화합물이 충분한 탄소와 질소를 방출하여 pH 지시약을 돌릴 수 있기 때문입니다.
따라서, 이상적인 재료를 복용하지 않도록 플래티넘 핸들 대신 바늘을 사용하여 심는 것이 이상적입니다.
뿌려졌다.
반면에, 생화학 적 시험의 배터리가 문제의 미생물의 동정을 위해 심어지고있을 때, 다른 매체로부터 단백질 또는 탄수화물의 드래그를 피하기 위해 구연산염 테스트가 가장 먼저 접종되는 것이 중요하다.
이 상황에서 오식 (false positive)을 취하는 것은 가능합니다. 왜냐하면 실수로 도입 된 이러한 물질 중 어느 것이 든 물질 대사가 일어나서 pH 변화를 일으키기 때문입니다.
물질의 끌림을 피하는 또 다른 방법은 핸들을 잘 태우고 한 시험과 다른 시험 사이에 새로운 접종을하는 것입니다.
접종 균을 수행하기 위해 식민지를 만질 때도주의를 기울여야한다. 이전에 설명 된 바에 따라 박테리아가 들어오는 배양 물에서 한천의 일부를 끌어내는 것이 피해야한다..
이러한 의미에서 Matsen, Sherris 및 Branson은 다른 탄소원의 이동을 피하기 위해 구연산염 테스트 접종 전에 생리 학적 솔루션으로 접종 물을 희석하는 것이 좋습니다.
색상 강도
시험이 양성일 때 생산되는 색상의 강도는 상업용 주택에 따라 다를 수 있음을 고려해야합니다.
또한 24 시간 째 양성 반응을 보이는 미생물이 있지만 pH를 변화시키기 위해서는 48 시간 이상이 걸리는 다른 균주가 있습니다.
참고 문헌
- Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 세균의 동정을위한 생화학 적 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스 아르헨티나.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 학적 진단. 5th ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
- BD 실험실 BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. 이용 가능 : bd.com
- 영국 실험실. Simmons Citrate 한천. 구매 가능 : britanialab.com
- Valtek 진단 실험실. Simmons Citrate 한천. 구매 가능 지역 : andinamedica.com.