몫:
Voges-Proskauer 테스트 기초, 준비 및 사용
그 보그 - 프로스카 우어 테스트 Enterobacteriaceae에 속하는 세균을 확인하는 데 사용되는 생화학 적 검사입니다. 특히 균주를 구별하는 것이 유용하다. 대장균 ~ 중 클렙시 엘라 및 엔테로 박터, 다른 사람들과.
이 시험은 RM / VP라는 머리 글자로 잘 알려진 methyl red-Voges Proskauer라고 불리는 액체 배지에서 수행됩니다. 이 배지는 완충 된 폴리 펩톤, 글루코스, 인산 디 칼륨 및 증류수로 구성된다.
현재의 RM / VP 배지는 Clark and Lubs 배지의 변형이며 원래는 더 낮은 농도의 펩톤과 포도당을 함유하고있었습니다. 그러므로 적은 양의 수소 이온이 생성되어 양성 Voges-Proskauer 반응에 필요하다..
시험은 산소의 존재 하에서 아세토라는 최종 생성물을 중성 렌 글리콜 통해 포도당을 사용하여 형성하는 상기 미생물의 능력과 알칼리성의 pH에 근거.
RM / VP 배지에서 Voges-Proskauer 검사를 나타낼 수있을뿐만 아니라 메틸 레드 검사도 나타낼 수 있습니다.
색인
- 1 재단
- 1.1 Voges-Proskauer 테스트의 기초
- 1.2 시험 및 해석의 개발을위한 기초
- 2 준비
- 2.1 매체 RM / VP
- 2.2 Voges A Reagent
- 2.3 Voges B 시약
- 3 Voges-Proskauer 검사 절차
- 3.1 시험 개발
- 4 사용
- 5 품질 관리
- 6 참고 문헌
재단
Voges-Proskauer 테스트의 기초
배지에 존재하는 pluripepton은 박테리아 성장에 필수적인 영양 요구 사항을 제공합니다. 포도당은 주요 성분입니다. 많은 박테리아는 포도당을 대사하고 피루브산을 형성하는 능력을 가지고 있습니다..
피루브산은 포도당의 신진 대사의 중점이며, 거기에서 각각의 미생물은 다른 경로를 취할 수 있습니다. 몇몇 혼합 형태, 예컨대 2,3- 부탄디올 형성 락트산, 아세트산, 포름산 및 숙신산 및 기타 제품과 같은 중성.
Voges Proskauer 테스트 - 더 아세틸 카비 놀, 메틸 (아세토)를 형성하는 상기 미생물의 능력을 호기성 조건 하에서 중간체 2,3- 부탄디올 밝혀.
아세토 인은 환원되어 2,3- 부탄디올을 형성하지만이 반응은 가역적이므로 2,3- 부탄디올이 산화되면 아세토 인이 형성된다. 따라서 산소는 필수적이다..
인산 디 칼륨은 6.9 ± 0.2의 pH에서 혼합물을 약화시키는 완충액입니다..
시험 및 해석의 발전을위한 기초
반응을 입증하기 위해 Voges A와 Voges B로 알려진 두 가지 시약 (Barrit 시약)을 사용하여 개발을 수행해야합니다.
Voges A는 α- 나프톨의 5 % 용액이며 Voges B는 40 % 수산화 칼륨 제제입니다. 수산화 칼륨이 없으면 40 % 수산화 나트륨으로 대체 할 수 있습니다.
Α-naphthol은 반응 색상의 강도를 증가시키는 촉매제이므로 시험을보다 민감하게 만듭니다. α-naphthol은 반드시 먼저 첨가되어야하며 매질이 산소와 접촉하도록 튜브를 교반해야합니다. 이러한 방식으로, 존재하는 아세토 인은 디 아세틸로 산화되고, 2,3- 부탄디올은 산화되어 아세토 인을 형성하여 디 아세틸.
따라서, α-나프톨 차례로 아미노산 아르기닌의 구아니딘 핵 본 합류 한 디 아세틸, 상기 pluripeptonas에서 후자 합류.
그 부분에 대해, 수산화 칼륨 또는 수산화 나트륨은 CO2 펩톤과 반응한다. 이 반응은 분홍색 연어 색상의 형성을 유발하여 튜브를 매우 잘 흔들어 뚜렷하게 볼 수 있습니다..
순간적으로 착색이 일어나기 위해서는 diacetyl, peptone 및 α- naphthol을 정확히 혼합해야합니다. 이것이 일어나지 않으면 통을 해석하기 전에 15 분 동안 튜브를 쉰 상태로 두십시오..
일반적으로 약한 핑크색을 볼 수있는 2 ~ 5 분 후에 양성 반응을 보입니다. 30 분에서 1 시간 동안 방치하면 색의 강도가 최대가됩니다 (짙은 빨간색).
국물이 노란색 일 때 음성 테스트가 분명합니다. 1 시간 후, 시험 결과가 음성이면, 수산화 칼륨이 α- 나프톨에 대한 반응의 결과로 구리 색이 형성 될 수있다.
준비
중간 RM / VP
탈수 된 배양액 17g을 달아 증류수 1L에 녹인다. 5 분 동안 기다리십시오. 끓을 때까지 가열하여 완전히 용해 시키십시오. 3 ~ 4ml를 튜브에 넣고 121 ℃에서 15 분간 오토 클레이브에서 살균하십시오..
탈수 된 배양액은 베이지 색이고 준비된 배지는 밝은 호박색이다.
배지의 최종 pH는 6.9 ± 0.2이다..
보그스 시약
α- 나프톨 5g을 달아 에틸 알콜 (절대) 50ml에 녹인다. 이어서 에틸 알코올을 계속 가하여 100ml로한다..
시약 보그스 B
40g의 수산화 칼륨을 비이커에 넣고 50ml의 증류수에 녹인다. 유리는 온도를 조절하기 위해 찬물 수조에 두어야합니다. 왜냐하면 준비 시간이 급격히 증가하기 때문입니다.
용액을 차게 한 후 눈금이있는 풍선으로 옮기고 증류수로 100 mL까지 가져온다..
보그 - 프로스카 우어 검사 절차
Voges-Proskauer 검사를 수행하기 위해 RM / VP 배지에 18 ~ 24 시간의 순수 배양에서 연구중인 미생물을 접종합니다.
접종은 너무 조밀하지 않아야합니다. 때로는 항온 처리가 며칠 동안 필요하지만 그것은 35 ~ 37 ° C에서 24 ~ 48 시간 동안 배양됩니다. 코완 (Cowan)과 스틸 (Steel)은 장내 Enterobacteriaceae의 모든 Voges-Proskauer (VP) 종을 검출하는데 필요한 최소 배양 시간은 5 일이라고 생각합니다.
시험 개발
튜브에서 1 mL 나누기를 분리하고 다음과 같이 전개를 수행하십시오 : Voges A 시약 12 방울 (0.6 mL)과 Voges B 4 방울 (0.2 mL)을 넣고 통기시키고 놓으십시오 수행하기 전에 5-10 분 동안. 그러나 검사가 여전히 음성이면 30 분에서 1 시간 후에 관을 관찰합니다.
분홍색 - 적색의 외관은 Voges-Proskauer 반응이 양성인 것을 나타냅니다. 매질이 황색을 유지하면 반응은 음성이다..
표시된 순서와 양으로 개발자를 추가하는 것은 위음성을 피하기 위해 필수적입니다..
사용
Voges-Proskauer 검사는 다음과 같은 균주를 구별하는 데 유용합니다. 대장균 VP 선구균 인 Klebsiella, Enterobacter, Serratia의 VP 음성이며,.
품질 관리
대조 균주를 사용하여 준비된 배지의 품질을 테스트 할 수 있습니다. 대장균 ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, 프로 테우스 미라 빌리스 ATCC 43071, 살모넬라 티피 머륨 및 엔테로 박터 클로 아카에 ATCC 13047.
예상되는 결과는 Voges-Proskauer 반응이 K. pneumoniae 및 E. cloacae. 나머지는 부정적 반응을 일으킨다..
참고 문헌
- 영국 실험실. MR-VP Medium. 구매 가능 : www.britanialab.com
- 마이크로 키트 실험실 M-Ident Voges Proskauer입니다. 2014. 이용 가능 : http://www.medioscultivo.com
- Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 세균의 동정을위한 생화학 적 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스 아르헨티나.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 학적 진단. 5th ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.