몫:
EC broth 기초, 준비 및 사용
그 EC 브로스 또는 국물 대장균 선택적 액체 배양 배지입니다. 이 매체는 물과 음식 샘플에서 가장 가능성있는 수 (NMP) 기법을 사용하여 총 대장균 군과 대변 군을 세는 표준 방법으로 권장됩니다. 대장균.
EC broth는 triptein, lactose, 담즙산, 인산 2 칼륨, 인산 일 칼륨, 염화나트륨 및 물로 구성됩니다. 그 수식은 총 대장균 군의 성장을 촉진하고 다른 수반 미생물의 발생을 막기 위해 전략적으로 고안되었습니다.
박테리아 대장균 물과 음식물에서 오염 물질로 존재하는 주요 분 변계 대장균으로 위장관에 중요한 영향을 미친다..
많은 혈청 형이 있음을 주목해야한다. 대장균; (EEC), 장폐색증 (EEC), 장폐색증 (EPEC), 장 독성 (ETEC) 및 장 창성 (EAEC).
이 수단은 모든 것을 개발할 수있는 능력을 가지고 있지만, 그것들을 구별 할 수는 없습니다. 이렇게하려면 추가 테스트를 수행해야합니다..
총 대장균 군과 대변 군의 검색을위한 가장 가능성있는 수 (NMP)에 의한 물과 음식의 미생물 학적 연구는 여러 단계로 이루어진 프로토콜이다. 추정 단계, 확인 단계 및 완료 단계. EC broth는 확인 단계에서 사용됩니다..
색인
- 1 재단
- 1.1 EC 배양액
- 1.2 novobiocin으로 변형 된 EC broth
- 2 준비
- 2.1 EC 브로스
- 2.2 novobiocin으로 변형 된 EC broth
- 3 사용
- 3.1 총 대장균 군 및 대변 군 분석
- 4 품질 관리
- 5 권장 사항
- 6 참고 문헌
재단
EC 브로스
EC 배지는 박테리아가 포함 된 총 및 대변의 대장균 군의 최적 발달에 필요한 영양 요소를 제공하는 것에 기초한다 대장균.
이 영양 요소는 립틴 (triptein)에 의해 제공되며 펩타이드와 아미노산의 훌륭한 공급원이됩니다. 또한 발효 탄수화물 인 락토오스가 들어있어 박테리아가 가스를 생산하는지 보여줄 수 있습니다..
반면에, 배지는 샘플에 존재할 수있는 그람 양성 미생물의 성장을 억제하기 때문에 선택적 특성을 제공하는 담즙산 염을 함유한다..
마찬가지로 인산 디 칼륨과 인산 일 칼륨도 pH 균형 시스템의 역할을합니다. 이 시스템은 미생물에 의해 발효 될 때 배지에 함유 된 락토오스가 배지를 산성화시키는 경향이 있기 때문에 필수적이지만 인산염에 의해 보상됩니다.
그러므로 통제되지 않은 산성도가 요구되는 미생물의 적절한 개발에 영향을 미칠 수 있기 때문에 이러한 요소는 필수적이다..
염화나트륨은 삼투압으로 매질을 안정화 시키지만, 물은 존재하는 용질의 용매이며 매질에 액체 일관성을 제공한다.
노보 비신으로 변형 된 EC 배지
Okrend와 Rose는 novobiocin으로 변형 된 EC broth라고 불리는 다양한 EC broth를 만들었습니다. 수정은 담즙 염의 농도 감소 및 20 mg / dl의 노보 바이오 신의 첨가로 이루어졌다.
이 수정은 대장균 장 출혈 (O157 : H7).
이 박테리아 혈청 형은 용혈성 요독 증후군 (HUS)을 일으킬 수있는 심각한 출혈성 대장염을 일으 킵니다. 이는 다시 급성 신부전을 유발할 수 있으며, 고령자에서 최대 50 %까지 도달 할 수있는 높은 사망률을 보입니다.
오염 된 식품의 섭취로 인해 매년 발생하는 이병과 사망으로 인해 미 농무부 (USDA)는이 수단의 사용을 널리 권장합니다.
준비
EC 브로스
탈수 된 배지 37.4g을 계량하여 증류수 1L에 녹인다. 혼합물은 5 분 동안 방치되어야합니다. 이어서, 열원에서 용해가 자주 용해됩니다..
녹은 후에는 이전에 더럼 튜브가있는 테스트 튜브에 분배됩니다. 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 소독하십시오..
배지의 pH는 6.9 ± 0.2이어야한다. 탈수 된 배지의 색상은 베이지 색이며 연한 호박색입니다..
와인은 사용하기 전까지 냉장고에 보관됩니다. 사용시 국물은 실온에 있어야합니다..
반면에, EC broth는 또한 두 배 농도로 준비 할 수 있습니다.
노보 비신으로 변형 된 EC 배지
탈수 된 배지 36.7g을 계량하고 물 1L에 용해시킨다. 나머지 준비는 위에서 설명한 것과 동일합니다..
사용
총 대장균 군 분석
EC broth는 NMP 방법에 의한 대장균 연구의 확인 단계에 이상적이며, 물 시료와 의약품 및 식품.
추정 단계에서 얻은 게으른 혼탁 및 가스 생산 수프는 2 %의 밝은 녹색 담즙과 EC broth.
총 대장균 군에 대하여 EC broth는 37 ℃에서 24 시간에서 48 시간 동안 aerobiosis에서 배양되고, 대변의 대장균 군에서는 44 ℃에서 24 시간에서 48 시간 동안 aerobiosis에서 배양된다.
두 경우 모두 다음과 같은 방식으로 해석됩니다. 가스 생산이있는 탁한 튜브는 양으로 간주됩니다. 24 시간 내에 가스가 생성되지 않으면 최대 48 시간 동안 배양을 계속합니다.
EC 양성 배지는 Mac Conkey 한천, EMB 한천 또는 엔도 한천과 같은 선택적 배지에서 다시 시드하는 완전한 확인 단계로 넘어갑니다..
사용 된 배지가 노보 바이오신으로 변형 된 EC라면, 양성 튜브는 Mac Conkey 한천을 소르비톨.
품질 관리
품질 관리는 준비된 매질의 각 배치에서 수행되어야합니다. 첫째, 매체의 무균 성을 평가해야합니다. 이러한 의미에서, 하나 또는 두 개의 배양액을 37 ℃에서 24 시간 동안 에어로 바이오 시스에 접종하지 않고 배양한다. 예상되는 결과는 탁도 또는 색 변화가없는 투명한 국물입니다.
둘째, 다음과 같은 박테리아를 사용할 수있는 알려진 균주의 성장을 평가해야한다. 대장균, ATCC 8739, 대장균 ATCC 25922, 살모넬라 티피 무리 움 ATCC 14028.
모든 경우에 만족스러운 미생물 발달이 기대되며, 대장균 살모넬라 균에 대한 가스가없고.
컨트롤에 포함될 수있는 다른 변종은 다음과 같습니다. 포도상 구균 (Staphylococcus aureus) ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. 이들 균주는 완전히 금지되어야한다.
권장 사항
-더럼 튜브 배치는 대장균 군 연구에 필수적입니다..
-멸균하기 전에 시험관에 배지를 분배하고,.
-매체의 준비가 3 개월 이상인 경우에는 사용하지 마십시오..
-매체의 일반적인 특성에 변화가 있으면 사용하지 마십시오..
참고 문헌
- 영국 실험실. EC 매체. 구매 가능 : britanialab.com
- 대장균 장 출혈성. 식량 안보 및 공중 보건 센터. 구매 가능 : cfsph.iastate.edu
- Neogen Corporation. 중간 EC. 구매 가능 : foodsafety.neogen.com
- 네오 겐 노보 바이오 신으로 변형 된 중간 EC. 구매 가능 : foodsafety.neogen.com
- Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. 탐지, 격리 및 특성 규명 대장균 투쿠 만 (Tucumán) 지방의 콘셉 시온 (Concepción)에있는 정육점에서 채취 한 신선한 쇠고기에서 얻은 시가 독소 생산자. Arg에 의한 Rev Microgol; 2010, 42 (4) : 284-287. 이용 가능 : www.scielo.org.