몫:
한천 혈액 기초, 사용 및 준비
그 혈액 한천 그것은 농축 된 고체 매체, 미분이지만 선택 적이 지 않다. 임상 시료 나 계대 배양 물로부터 다양한 미생물의 회수 및 성장에 사용됩니다.
실험실에서받은 대부분의 임상 샘플을 파종하기 위해 고전적인 혈액 한천을 포함시켜야합니다. 특정 변경으로 준비하지 않는 한, 유용하지 않은 대변 표 제외.
이 배지는 기본적으로 농축 된 한천과 5 %의 혈액으로 구성됩니다. 한천의 염기는 필요에 따라 다를 수 있지만 주로 펩톤, 아미노산, 비타민, 고기 추출물, 염화나트륨, 한천 등으로 구성됩니다.
혈액의 경우 양, 토끼 또는 말과 같은 동물의 혈액을 채취하기 위해서는 대개 생물학적 테 테륨과 접촉해야합니다. 그러나 이것이 항상 가능한 것은 아니며 때때로 인간의 피가 사용됩니다.
혈액 한천 배지는 실험실에서 준비하거나 전용 된 회사를 위해 구입할 수 있습니다. 이 매체의 준비는 가장 섬세한 것 중 하나이며, 준비 과정에서 부주의로 인해 오염 된 배치가 생길 수 있습니다..
그래서 가능한 모든주의 사항을 취해야하며 결국에는 준비된 100 개당 37 ° C 1 배 온도에서 배양하여 품질 관리를 수행해야합니다.
색인
- 1 재단
- 2 용도
- 2.1 혈액형 선택
- 2.2 기본 한천 유형의 선택
- 2.3 준비에 사용 된 기본 배지에 따른 혈액 한천의 용도
- 3 준비
- 3.1 무게와 용해
- 3.2 살균
- 3.3 혈액의 응집
- 3.4 배양 접시에 붓는다.
- 4 참고
재단
혈액 한천은 풍부하고 차별적이며 비 선택적 인 매개체라는 특징을 이미 가지고 있다고 언급되었습니다. 이 속성 각각의 지하실은 아래에 설명되어 있습니다.
혈액 한천은 한천 기지에 5 ~ 10 %의 혈액을 주요 첨가제로 함유하고 있기 때문에 농축 된 배지입니다. 두 화합물 모두 많은 양분을 함유하고 있으며,이 특성은 재배 가능한 박테리아의 대부분이 그 안에 자라게합니다.
그 성장은 제한없이 발생합니다. 이런 이유로 그것은 비 선택적입니다. 그러나, 일부 미생물의 성장을 방지하고 다른 미생물의 성장을 촉진하는 화합물이이 매질에 첨가되면, 선택적으로됩니다. 특정 유형의 항생제 또는 항진균제가 추가되는 경우입니다.
마찬가지로, 혈액 한천은 베타 - 용혈성, 알파 - 용혈성 및 감마 - 용혈성 세 가지 유형의 박테리아를 구별 할 수 있기 때문에 차별화 된 매개체입니다..
베타 - 용혈성 그 때문에 용혈을 생산하거나 ß -hemólisis 미생물을 ß, 식민지 주위에 분명 후광을 형성, 용균 또는 완전히 적혈구를 파괴 할 수있는 능력을 가지고있다 베타 - 용혈성라고.
ß- 용혈성 박테리아의 예는 다음과 같습니다. Streptococcus pyogenes 및 Streptococcus agalactiae.
알파 용혈병은 헤모글로빈이 산화되어 메트 헤모글로빈으로 부분적인 용혈을 수행하여 식민지 주위에 녹색을 띄게합니다. 이 현상은 용혈 α 또는 α 용혈로 알려져 있으며 박테리아는 α 용혈로 분류됩니다.
α- 용혈성 박테리아의 예는 다음과 같습니다. Streptococcus pneumoniae 및 연쇄상 구균 그룹의 비리다.
마지막으로 감마 - 용혈 또는 비 용용이라고 불리는 박테리아가 있습니다. 이들은 한천에서 변화를 일으키지 않고 자라며 γ- 해독 (gamma-hemolysis)으로 알려진 효과를 나타내며 미생물은 γ- 용혈성이다.
γ- 용균성 박테리아의 예 : D 군의 Streptococcus의 일부 균주 (Streptococcus bovis 및 Enterococcus faecalis).
용도
혈액 한천 배지는 미생물학 실험실에서 가장 일반적으로 사용되는 것 중 하나입니다.
한천 배지 혈액에서 성장 할 수있는 미생물 중에는 : 엄격한 호기성 박테리아, 통성, 호기성, 혐기성, 그람 양성 또는 그람 음성 박테리아는 빠르게 성장이나 느린 성장.
곰팡이와 효모뿐만 아니라 영양 관점에서 요구하거나 귀찮은 일부 박테리아도 자랍니다. 마찬가지로, 대사율이 매우 낮은 균주를 계대 배양하거나 재 활성화하는 것이 유용합니다.
그러나, 혈액형과 한천의 선택은 회수가 의심되는 미생물과 플라크 (문화 또는 항생제)의 사용에 따라 달라질 수 있습니다..
혈액형 선택
혈액은 어린 양, 토끼, 말 또는 인간이 될 수 있습니다..
가장 권장되는 것은 어린 양의 피이며 일부 예외가 있습니다. 예를 들어, 권장 혈액이 말 또는 토끼 인 경우 Haemophilus 종을 분리하기 위해 어린 양의 혈액에 V 인자를 억제하는 효소가 있기 때문에.
가장 적게 권장되는 것은 인간이지만, 아마도 가장 많이 사용됩니다. 아마 가장 쉽게 구할 수 있기 때문입니다.
혈액은 섬유화되지 않아야하며 첨가제없이 건강한 동물에게서 얻어야합니다. 인간의 혈액을 사용하기 위해서는 몇 가지 사항을 명심해야합니다.
혈액이 박테리아 감염을 겪은 개인으로부터 오는 것이라면, 그들은 특정한 항체를 가질 것입니다. 이러한 조건 하에서 일부 박테리아의 성장은 저해 될 가능성이있다.
혈액 은행에서 얻은 경우 구연산염이 포함되어 있으며 특정 박테리아가 존재하지 않을 수도 있습니다. 반면에, 항생제를 복용중인 환자에서 혈액이 나오면 감수성 박테리아의 증식이 억제 될 수 있습니다.
그리고 혈액이 당뇨병 환자에게서 나왔다면 과량의 포도당은 용혈 패턴의 적절한 발달을 방해합니다.
기본 한천 유형의 선택
혈액 한천의 준비에 사용 된 기본 한천은 매우 광범위 할 수 있습니다. 그 (것)들의 사이에서 그들은 : 등 영양 한천, 뇌 심장 주입 한천, 트립 티카 콩 한천, 뮬러 힌튼 한천, 이어 마틴 한천, 컬럼비아 한천, 한천 브루셀라, 캄 필로 박터 한천,.
조제에 사용 된 기본 배지에 따른 혈액 한천 사용
양분 한천
이 염기는 가장 적게 사용되는데, 그 이유는 그것이 주로 비균질성 세균, 즉 장내 세균으로 자라기 때문입니다, 슈도모나스 sp, S. aureus, 바실러스 sp, 다른 사람 사이에서. Streptococcus를 분리하는 것은 권장하지 않습니다..
심장 뇌 주입 한천 (BHI)
그것은 혈액 한천의 기초로 가장 많이 사용되는 것 중 하나입니다. 왜냐하면 그것은 한천 박테리아의 성장에 필요한 영양소를 포함하고 있기 때문입니다. 연쇄상 구균 sp 및 기타 까다로운 박테리아. 용혈 패턴을 관찰하는 것은 적절하지 않지만.
어린 양은 보통이 기초와 함께 사용됩니다..
다른 미생물을 분리하기 위해 다른 화합물이 첨가되는 혈액 한천 변이체도 제조 할 수 있습니다. 예를 들어, 토끼 혈액, 시스틴 및 포도당이 보충 된 두뇌 심장 주입 한천은 Francisella tularensis.
반면에 시스틴 텔루 라이트는 Corynebacterium diphteriae. 인간 또는 양의 피를 사용할 수 있습니다..
첫 번째로 베타 용혈은 좁은 후광처럼 보일 것이고 두 번째로 후광은 훨씬 더 넓어 질 것입니다.
마찬가지로,이베이스는 바시 트라 신 (bacitracin), 옥수수 전분, 말 혈액 및 기타 농축 보충제 (IsoVitaleX)와 함께 속의 분리에 사용됩니다 헤모필루스 sp 호흡기 샘플로부터.
또한 항생제 인 chloramphenicol - gentamicin 또는 penicillin - streptomycin을 말 혈액과 함께 첨가하면 Sabouraud 포도당 한천보다 높은 수율로도 요구되는 병원성 진균의 분리에 이상적입니다. 그것은 특히 Histoplasma capsulatum.
버섯 대두
이 염기는 용혈 패턴과 optoquine과 bacitracin의 taxa와 같은 진단 검사의 수행을보다 잘 관찰하기 위해 권장됩니다. 그것은 일상적으로 사용되는 고전적인 혈액 한천입니다..
이 기초로 당신은 또한 특별한 혈액 한천을 준비 할 수 있습니다. Corynebacterium diphteriae, 텔루르 시스틴과 함께 및 어린 양의 피.
마찬가지로,이 한천과 양고기 혈액 및 카나마이신 - 반코마이신의 조합은 혐기성 균의 성장에 특히 이상적입니다 Bacteroides sp.
Agar Müeller Hinton
혈액이 보충 된이 염기는 다음과 같은 까다로운 미생물의 항생제를 수행하는 데 사용됩니다. 연쇄상 구균 sp.
그것은 또한 박테리아의 격리와 같은 유용합니다. 레지오넬라 · 뉴모 필라.
Agar Thayer Martin
이 배지는 Neisseria 속이 의심 될 때 혈액 한천을위한 기초로서, 특히 Neisseria meningitidis, 이후 N. 임질 혈액 한천에서 자라지 않는다..
또한 감수성 검사를 수행합니다. Neisseria meningitidis.
Agar Columbia
이 염기는 위 생검 검사 시편 채취에 탁월합니다. 헬리코박터 파일로리.
매체가 존재할 수있는 다른 박테리아의 성장을 제한하기 위해 항생제 (반코마이신, 트리 메토 프림, 암포 테리 신 B 및 cefsulodin)이 7 %의 섬유소 양의 혈액을 첨가하여 제조 한.
인간 또는 양의 혈액, 날 리딕 산 (nalidixic acid) 및 콜리스틴 (colistin)이 보충 된이 같은 염기는 가디 넬라 (Gardnerella vaginalis). 또한 동일한 미생물의 항생제에 대한 항균제 감수성을 평가하는 데 이상적입니다.
또한, 혐기 세균 배양 용 혈액 한천의 제조, 아미노 글리코 사이드 및 반코마이신의 첨가에 사용된다.
이 기지는 우리가 제대로 용혈의 패턴을 관찰 할 수 있습니다.
브루셀라 한천
비타민 K를 첨가하여 혈액 한천의 기초로 사용되는이 배지는 혐기성 세균 배양에 이상적입니다. 이 경우 양의 혈액을 사용하는 것이 좋습니다.
캄 필로 박터 한천
캠필로박터 한천 5 % 양 혈액 다섯 항생제 (팔로, 암포 테리 신 B, 트리 메토 프림, 폴리 믹신 B와 반코마이신)로 보충 된, 분리하는 데 사용되는 중간 캄 필로 박터 제주 니 대변 샘플.
준비
각 상업 집은 포장의 뒷면에 1 리터의 배양 배지를 준비하는 지침을 제공합니다. 선택한 기본 한천에 따라 원하는 양을 준비하기 위해 해당 계산을 할 수 있습니다.
무게와 용해
한천은 탈수 (분말)되기 때문에 pH 7.3으로 조정 한 증류수에 용해시켜야한다..
선택한 기본 한천에 표시된 양을 칭량하고 fiola에 해당하는 양의 물에 용해시킨 다음 온화한 열로 가열하고 모든 분말이 용해 될 때까지 회전 운동으로 혼합합니다..
소독하다
일단 녹인 후, 121 ℃에서 20 분 동안 오토 클레이브에서 멸균하십시오.
혈액의 골재
오토 클레이브를 떠날 때 40 ~ 50 ° C 사이에서 온도가 진동 할 때까지 fiola가 식도록하십시오; 인간의 피부가 지탱할 수있는 온도이며, 한천은 아직 고화되지 않았습니다..
이를 위해 fiola를 손으로 만지며 열이 견딜 수있는 경우, 해당 량의 섬유화 혈액 (한천 1 리터당 50 ml)을 첨가하는 것이 이상적인 온도입니다. 부드럽게 섞어 균질화하십시오..
혈액 응집체가 통과하는 것은 매우 중요합니다. 왜냐하면 배양기가 매우 뜨거울 때 적혈구가 파괴되고 용질이 관찰되지 않기 때문입니다.
너무 추울 경우 덩어리가 형성되고 매체의 표면이 부드러워 져서 플루트를 제대로 만들지 못합니다.
페트리 접시에 붓는다.
혈액을 균질화 한 후 즉시 멸균 페트리 접시에서 제공하십시오. 각 페트리 접시에 약 20ml를 붓습니다. 이 절차는 층류 후드 또는 버너 근처에서 수행됩니다.
페트리 접시에서 혈액 한천을 제공 할 때, 기포는 플레이트의 표면에 남아 있지 않아야합니다. 이런 일이 발생하면 분젠 버너의 불꽃이 신속하게 판을 통과하여 제거됩니다..
플레이트를 고형화시키고 사용하기 전까지 반전 된 냉장고 (2-8 ° C)에 보관합니다. 혈액을 사용하기 전에 한천 플레이트를 부드럽게해야한다..
준비된 판은 약 1 주간 지속됩니다..
참고 문헌
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