Agar Müeller Hinton 기초, 준비 ​​및 사용



그 뮐러 힌튼 한천 그것은 고기 주입, 카제인 산 펩톤, 전분, 한천 및 증류수로 구성되어 고체, 비 선택적 영양 매체입니다. 이 배지는 가장 빠르게 성장하는 박테리아의 우수한 미생물 발달을 허용합니다.

그것은 원래 John Howard Müeller와 Jane Hinton에 의해 만들어졌으며 영양 요구가 많은 박테리아를 Neisseria gonorrhoeae 및 Neisseria meningitidis. 그러나 그 특성상 항생제에 대한 감수성 연구에 이상적이며 신뢰성 있고 재현성있는 결과를 제공합니다.

따라서, 뮐러 힌튼 한천 확산법 디스크 커비 의해 항균 감수성 시험의 실행 항균제 감수성 시험에 대한 임상 실험 표준 협회 (CLSI) 유럽위원회에 의해 승인 배지는 바우어.

색인

  • 1 재단
  • 2 준비
  • 3 용도
    • 3.1 항균 기술
    • 3.2 Müeller Hinton agar에 디스크의 전략적 배치
  • 4 잘못된 결과의 원인
  • 5 제한
  • 6 품질 관리
  • 7 참고

재단

비 선택적 영양 배지이기 때문에 대부분의 병원성 박테리아의 증식에 탁월합니다..

반면에, 그 간단한 조성은 디스크 확산법에 의한 자화율 시험의 본질적인 특성 인 물질을 쉽게 확산시킵니다..

이의 또 다른 특징은 sulfonamides, trimethoprim 및 tetracyclines을 효과적으로 평가할 수있는 저해제가 적다는 점입니다..

그러나 매체가 다음을 포함하여 적절한 기능을 보장하기 위해 특정 조건을 충족시켜야한다는 점을 명심해야합니다.

pH 조정, 한천 농도 및 티민, 티미 딘, 칼슘의 적절한 농도++, Mg++ 및 Zn++.

방법론이 표준화되어 있으므로 다음과 같이 모든 매개 변수가 충족되어야한다는 것을 알아야합니다.

접종 농도, 농도의 항생제 디스크 보존 한천 디스크의 해당 번호를 삽입하는 디스크의 특정 항생제의 다른 전략적 위치 사이의 거리, 분위기, 온도 및 시간 배양.

준비

탈수 된 Müeller Hinton 배지 37g을 계량하여 증류수 1L에 녹인다. 교반하면서 매체를 가열하여 용해시킵니다. 1 분간 끓여야한다..

121 ° C에서 15 분 동안 멸균하기 위해 오토 클레이브를 가져갑니다. 오토 클레이브에서 제거 할 때, fiola는 냉각시키기 위해 50 ° C의 수조에 두어야합니다. 직경 10cm의 멸균 페트리 접시에 25 ~ 30ml 붓는다..

판재는 평균 두께 4mm (이상적)이어야하며, 허용 범위는 3-5mm입니다.

Müeller Hinton 한천 배지를 사용하여 혈액 한천을 준비하고자하는 경우 플레이트에 담기 전에 5 % 멸균 및 디 박브 레이 티드 양고기 혈액을 붓습니다..

배지의 최종 pH는 7.2에서 7.4 사이 여야합니다.

사용하기 전까지는 냉장고에 투자하고 저장하십시오. 사용하기 전에 플레이트가 실내 온도에 도달하도록하십시오..

준비된 매체의 색상은 밝은 베이지 색입니다..

용도

대부분의 급속 성장하지 않는 병원체에 항생제 감수성 검사를 수행하는 데 사용됩니다.

한천에 혈액이 보충되면 다음과 같은 까다로운 미생물의 항생제 검사를 수행합니다. Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, 다른 사람 사이에서. 그것은 또한 격리에 사용되었습니다. 레지오넬라 · 뉴모 필라.

항생제 기술

항생제 검사를 시행하기 전에 1.5 x 10에 해당하는 박테리아 용액을 준비해야합니다8 세포.

이를 위해, 순수 배양으로부터 3~4 콜로니를 가지고 표준 맥팔랜드 비교 멸균 식염수로 조정 하였다 2~6 시간 및 농도 배양 대두 국물 트립 티카 또는 뮐러 힌튼 배지에 현탁 0.5 %.

그들이 미생물을 요구하는 경우, 식민지는 맥 파 랜드의 0.5 % 농도에 도달 할 때까지 직접 중단 될 수 있습니다. 이어서, 준비된 박테리아 용액을 함침시킨 뮐러 힌튼 플레이트를 파종한다.

이렇게하려면 용액에 면봉을 찍은 다음 튜브의 벽을 눌러 과도한 액체를 제거하십시오. 면봉이 표면 전체를 통과 한 후 손대지 않은 부위를 남긴 직후에 판을 약간 돌려서 뿌리십시오. 작업이 2 번 더 반복됩니다..

10 분 동안 서서 멸균 포셉과 함께 항생제 디스크를 놓고 그 사이에 24mm의 공간을 두십시오. 각 디스크를 한천에 놓은 후 클램프로 가볍게 눌러 가볍게 눌러서 잘 접착되도록합니다..

과정이 끝나면 판을 뒤집어서 16 ~ 18 시간 동안 곰팡이가 생기지 않도록 35 ~ 37 ℃에서 배양합니다. 까다로운 미생물 인 경우 미공양증이 필요할 수 있으며 항생제에 oxacillin 디스크가 포함되어 있으면 24 시간 이내에 읽어야합니다.

눈금자는 각 후광의 직경을 측정하는 데 사용됩니다. 결과는 mm 단위로 기록해야합니다. 결과로 얻은 값은 현재 CLSI 매뉴얼에 게시 된 절단 점 표와 상호 관련됩니다.

경우에 따라 민감한 (S), 중간 (I) 또는 내성 (R)으로보고하십시오..

항생제는 격리 된 미생물 및 발생하는 감염의 유형에 따라 선택됩니다.

때로는 항생제의 전략적 배치가 표현형 저항 패턴을 나타내는 것으로 고려되어야한다.

Müeller Hinton 한천에 디스크를 전략적으로 배치

enterobacteria 들어, clavulanic 산성 디스크는 3 세대와 4 세대 cephalosporins 앞에 배치해야합니다. 달걀 모양의 넓이는이 균주가 확장 된 스펙트럼 β-lactamase (ESBL)의 생산자임을 나타낸다. 이것은 환자가 어떤 세 팔로 스포린으로 치료되어서는 안된다는 것을 의미합니다.

Staphylococcus에서는 클린다마이신 원반 (D-test) 앞에 에리스로 마이신 또는 아지트로 마이신 디스크를 놓는 것이 중요합니다..

클린다마이신 평탄화 에리트로 마이신 내성 할로 및 할로는 변형이 유도 변형 (RIC)을 클린다마이신하는 저항을 갖는 것을 나타낸다. 이것은 클린다마이신 치료가 효과적이지 않다는 것을 의미합니다..

27mm의 거리 이미페넴 디스크면에 대 장내 AMP C 유도 균주와 몇몇 비 - 발효 그람 간균, 원판 세프, cefoxitin 또는 피 페라 실린, 타조 박탐 검색.

imipenem을 마주 보는 디스크 중 하나에서 평평하게 된 후광은 유도 성 AMP C.

25mm면의 거리에, 항시 AMP C의 cloxacillin Disc의 세프 (30 ㎎), 세포 탁심 (30 mg)을 500 .mu.g 검색. 세 팔로 스포린 중 하나의 넓은 후광은 양성을 나타냅니다..

또한, 18mm의 거리로 페닐 보론 산 (400 mg)을 함침 디스크 cloxacillin 9mm 호 와트 만 (6)에 의해 디스크를 대체 할 수있다. 이전과 동일하게 해석됩니다..

마지막으로, metallo-beta-lactamase의 생산을 조사하기 위해, 특히 Pseudomonas aeruginosa, 함침 디스크 15 mm의 거리에 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA 750g) 및 티오 글리콜 프로피온산 이미페넴과 메로페 디스크를 얼굴 (SMA 300 mg)을, 10 ㎕의 사용할.

시험은 EDTA / SMA 디스크쪽으로 imipenem 또는 meropenem halo가 넓어지면 긍정적입니다. 이 결과는 수정 된 호지 테스트에 의해 확인되어야합니다.

이 방법은 대장균 Müeller Hinton 플레이트상의 ATCC 25922. imipenem 디스크가 플레이트의 중앙에 놓인 다음 플루트가 디스크에서 변형되어 주변으로 향하게됩니다. P. aeruginosa 용의자 플레이트 당 최대 4 개의 변종을 테스트 할 수 있습니다..

구강 주위에 imipenem 후광의 왜곡 영역이 있으면 테스트가 긍정적입니다..

잘못된 결과의 원인

-보존이 잘 안되는 항생제의 디스크는 잘못된 저항을 일으킬 수 있습니다. 예를 들어, oxacillin 디스크는 온도 변화에 매우 취약합니다.

-지시 (산) 아래에 배지의 pH는 아미노 글리코 사이드와 마크로 라이드 (FALSE 저항의 위험) 작은 할로, 할로 큰 페니실린, 테트라시 클린 및 novobiocin (FALSE 감도의 위험)을 생성.

-pH가 지시 된 (알칼리성) 이상이면 위에 기술 된 효과가 역전됩니다.

-높은 thymine과 thymidine 농도를 갖는 media는 sulfonamides와 trimethoprim의 억제 halo를 유의 적으로 감소시킨다.

-고농도의 칼슘과 마그네슘은 aminoglycosides, polymyxin B 및 테트라 사이클린의 가식 균주에 대한 내성을 일으킨다. Pseudomonas aeruginosa.

-칼슘과 마그네슘의 농도가 낮 으면 아미노 글리코 사이드, 폴리 믹신 B 및 테트라 사이클린이 Pseudomonas aeruginosa.

-아연의 존재는 carbapenems 디스크 (imipenem, meropenem 및 ertapenem)의 결과에 영향을 미친다..

-3mm 미만의 매질 두께는 잘못된 감도 결과를 생성하는 반면, 5보다 큰 두께는 잘못된 저항을 생성합니다.

-항생제 방출이 즉각적이기 때문에 항생제에 디스크를 동원하면 변형 된 후광이 생길 수 있습니다.

- 후광 억제 상태를 측정 할 필요가 균일 또는 한천 수렴있을 것이다 약한 접종 성장 후광이 정상보다 더 줄 수있는 외에, 그 결과에 영향을 미칠.

-과부하 된 접종 물은 정상보다 작은 할로겐을 줄 수 있습니다.

-디스크 사이의 거리를 고려하지 않으면 하나의 후광이 다른 후광과 중첩되어 올바르게 읽을 수 없습니다..

-CO와 함께 품어 라.2 테트라 사이클린 및 메티 실린 디스크의 후광 크기를 증가시킵니다..

-35 ° C 이하의 온도에서 인큐베이션하면 더 큰 할로겐이 생성됩니다..

-혈액의 첨가는 술폰 아미드의 후광 크기를 감소시킨다.

제한

미생물에 대한 항생제로 입증 된 항생제의 감도 (시험관 내) 그것이 작동한다는 보장은 아닙니다. 생체 내.

품질 관리

배지에 올바른 양의 티민이 있는지 알아 보려면 균주를 뿌려야합니다 Enterococcus faecalis ATCC 29212에 따라 시험되었고 trimethoprim sulfamethoxazole (SXT)에 대한 감수성을 시험 할 때 만족스럽지 않거나 20mm를 초과하는 후광을 주어야한다.

참고 문헌

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  4. Difco Francisco Soria Melguizo 실험실. 5 % 양의 혈액을 가진 Müeller Hinton 한천. 이용 가능 : http://f-soria.es
  5. BD Müeller Hinton II 한천 실험실. 구매 가능 지역 : .bd.com
  6. 영국 실험실. 뮐러 힌튼 한천. 구매 가능 : britanialab.com
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 학적 진단. 5th ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
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