MIO 매체 기초, 준비 ​​및 사용



그 절반의 MIO Enterobacteriaceae에 속하는 박테리아 종의 확인에 도움이되는 생화학 적 검사입니다. 그것은 매우 영양가가 풍부하고 포도당, 효모 추출물, 펩톤, 트립틴, L- 오르니 틴 하이드로 클로라이드, 브로 모 크레졸 퍼플 및 한천.

약어 (MIO)의 의미는이 매체에서 관찰 할 수있는 각 매개 변수를 설명합니다. 운동성, 인돌 및 오르니 틴. 운동성은 미생물이 편모의 존재에 의해 움직이는 능력입니다. 이 특성을 관찰하기 위해서는 배지의 농도가 반고체 여야하므로 조제 물의 한천 함량이 적습니다..

인돌 생산은 아미노산 트립토판에 작용하는 트립토판 아제 효소의 존재를 입증하며 필요한 것은 인돌 생산을 가시화시키는 시약의 사용이다.

마지막으로, 오르니 틴은 박테리아가 아미노산을 탈 카복실화할 수 있는지, 즉 효소 orinithine 디카 르 복실 라제.

색인

  • 1 재단
    • 1.1 펩톤, 효모 추출물 및 트리 펩틴
    • 1.2 운동성
    • 1.3 포도당
    • 1.4 L- 오르니 틴
    • 1.5 pH 표시기
  • 2 씨를 뿌리고 발달시키는 기술
  • 3 준비
    • 3.1 MIO 매체
    • 3.2 Kovacs 시약 (Indole 시험 개발자)
  • 4 사용
  • 5 품질 관리
  • 6 참고 문헌

재단

펩톤, 효모 추출물, 트립신

이 요소들은이 매개체의 영양력에 기여합니다. 그들은 박테리아 발생을위한 필수 영양소와 필수 아미노산의 원천 역할을합니다..

또한 트립토판은 인돌, 피루브산, 암모니아 및 에너지를 방출하는 환원성 탈아 민화에 의해 트립토판을 분해하는 트립토판 분해 효소의 존재를 증명하는 트립토판의 공급원이다.

인돌은 무색이므로 에를 리치 (Ehrlich) 또는 코 박스 (Kovacs) 시약 5 방울을 첨가하여 그 존재를 알 수 있으며 둘 다 p- 디메틸 아미노 벤즈알데히드.

이 화합물의 알데하이드 그룹은 인돌과 반응하여 한천 표면에 고리 모양의 자홍색이 나는 생성물을 생성합니다.

색상의 흔적은 긍정적 인 증거로 간주되어야합니다. 잠시 후에 색상이 저하되기 때문에 테스트를 즉시 읽어야합니다..

반면에,이 검사는 오르니 틴의 운동성과 탈 카르 복 실화 결과를 기록한 후 밝혀야합니다..

통역

양성 판정 : Kovacs 시약을 추가 할 때 밝은 자홍 고리가 형성됨.

부정 시험 : 링 형성이 없다..

운동성

탁한 배지가 관찰되거나 초기 접종 주위로 팽창하는 두꺼운 성장 라인이있는 경우 이동하는 박테리아의 능력이 입증됩니다.

부정적인 운동성 테스트는 얇은 성장 선을 관찰함으로써 증명되며, 모든 주변은 성장이 없을 것입니다.

시약을 첨가하면 전체 매질을 흐리게하기 때문에 인돌을 드러내 기 전에 운동성을 읽는 것이 중요합니다.

모바일이지만 느리게 자라는 세균에서는이 배지에서 운동성을 증명하기가 어렵습니다. 이 경우 운동성 매체 또는 드롭 드롭 방법과 같은 다른 테스트 또는 방법을 사용하는 것이 좋습니다.

포도당

포도당은 에너지를 제공하는 것 외에도 배지를 산성화하는 발효 성 탄수화물이며, 아미노산 인 ornithine의 탈 카복실 화에 필요한 조건.

포도당의 발효는 항상 Enterobacteriaceae 발효 포도당에 속하는 모든 박테리아.

L- 오르니 틴

박테리아가 효소 인 ornithine decarboxylase를 생성하는 경우, 일단 배지가 포도당의 발효에 의해 산성화되면 작용할 수 있습니다.

효소 인 ornithine decarboxylase는 아미노산의 카르복실기에 작용하여 putresine이라 불리는 아민을 생산하여 배지를 다시 알칼리화시킵니다.

이 검사는 24 시간 동안 잠복기가 끝나면 읽어야합니다. 검사를 잘못하기 전에 거짓 음성으로 검사를 잘못 해석 할 수 있기 때문입니다..

발생하는 첫 번째 반응은 포도당의 발효이며, 따라서 배지는 초기 단계 (처음 10-12 시간)에 노란색으로 변한다는 것을 기억해야합니다. 이후 오르니 틴의 탈 카복실 화가 발생하면 매질은 자주색으로 변합니다.

Kovacs 시약을 첨가하면 매질의 색이 변하기 때문에 인돌을 밝히기 전에 오르니 틴 탈 카르 복 실화 시험을 해석하는 것이 중요합니다.

통역

부정 시험 : 중형 노란색 또는 노란색 배경.

양성 판정 : 완전히 보라색.

PH 표시기

이 경우에는 bromocresol purple이 사용됩니다. pH 변화가있을 때 계시 담당자. 산성화되면 표시기가 노란색으로 바뀌고 알칼리성 화되었을 때 보라색으로 변합니다..

씨앗 및 개발 기술

MIO 배지를 설치하기 위해 직선 루프 또는 바늘을 사용하고 연구 할 콜로니의 일부를 수집합니다..

깊은 펑크는 MIO 매체에서 직선으로 이루어집니다. 펑크가 같은 장소에서 수행되지 않으면 거짓 운동 이미지를 줄 수 있으므로 이중 펑크를 수행하는 것은 좋지 않습니다..

aerobiosis 37에서 24 시간에서 48 시간 동안 품어. 이 순서대로 결과를 관찰하십시오 : 운동성, 오르니 틴의 탈 카르 복 실화 및 최종적으로 인돌.

무균 적으로 배지 2 ml를 취하여 멸균 된 튜브로 옮겨서 인돌 테스트를 수행하면 음성 인 경우 원본 튜브의 나머지를 24 시간 동안 인큐베이터에서 다시 볼 수 있으므로 인돌을 다시 나타낼 수 있습니다.

인돌의 개발은 다음과 같은 방식으로 수행된다 : Kovacs 시약 3 내지 5 방울을 MIO 배지에 첨가하고 격렬하게 교반한다. 자홍색 붉은 색 반지가 나타나는지 아닌지 관찰됩니다..

준비

하프 MIO

31 그램의 MIO 배지를 칭량하고 1 리터의 증류수에 용해시킨다..

혼합물이 1 분 동안 끓을 때까지 가열하고, 한천이 완전히 용해 될 때까지 자주 저어 준다. 목화 뚜껑이 달린 13/100 시험관에 배지 4 ml를 분배하십시오.

121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 소독하십시오. 오토 클레이브에서 꺼내서 반 솔리드 블록이 형성되도록 랙에서 똑바로 세우십시오.

냉장고에 2-8 ° C에서 저장하십시오. 박테리아 균주를 심기 전에 성질을 유지하도록하십시오..

탈수 된 배지의 색상은 베이지 색이고 배지는 약간 보라색의 유백색을 나타낸다.

준비된 배지의 최종 pH는 6.5 ± 0.2

배지는 산성 pH로 황색으로 변하고 알칼리성 pH에서는 자주색이다..

Kovacs 시약 (Indole 시험 개발자)

이 시약은 다음과 같이 준비됩니다 :

아밀, 이소 아밀 또는 부틸 알콜 (이 세 가지 중 어느 하나) 150ml를 측정한다. 거기에 10g의 p- 디메틸 아미노 벤즈알데히드가 용해된다. 이어서, 진한 염산 50ml를 천천히 첨가한다.

준비된 시약은 무색 또는 담황색입니다. 앰버 병에 보관하고 냉장고에 보관해야합니다. 짙은 갈색은 그 열화를 나타낸다..

또한 Kovacs 시약은 Ehrlich 시약으로 대체 될 수 있습니다. 후자는 감수성이 높기 때문에 일부 그람 음성 비 발효 바실루 및 특정 혐기 세균에서와 같이 최소량으로 생산하는 박테리아에서 인돌을 밝히는 것이 바람직합니다.

사용

이 매체는 Enterobacteriaceae에 속하는 박테리아의 동정을위한 생화학 적 테스트 배터리를 보완하는 테스트입니다.

오르니 틴의 탈 카복실 화 데이터는 소아용 소아 즙, 긍정적 인 결과를주는 Shigella boydii, Shigella flexneri 및 S. dysenterieae, 네거티브를주는.

그것은 또한 부정적으로주는 Klebsiella 속, 엔테로 박터 (Enterobacter) 속에서 대부분의 종은 양성이다..

품질 관리

MIO 배지의 배치가 준비 될 때마다 대조 시험을 수행 할 수 있습니다. 이를 위해 알려진 또는 인증 된 균주를 사용하여 배지의 행동을 관찰합니다.

사용할 수있는 균주는 다음과 같습니다. Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes 및 프로 테우스 미라 빌리스.

예상되는 결과는 다음과 같습니다. E. coli 및 M. morganii. Dan M : +, I : + 및 O : +.

Klebsiella pneumoniae 모든 음 (M : -, I : -, O :-)을 준다.. 프로 테우스 미라 빌리스 및 Enterobacter aerogenes 단 M : + I : - 및 O : +.

참고 문헌

  1. Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 세균의 동정을위한 생화학 적 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스 아르헨티나.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott의 미생물 학적 진단. 12 ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 학적 진단. 5th ed. 편집 Panamericana S.A. 아르헨티나.
  4. 영국 실험실. MIO Medio 2015. 이용 가능 : britanialab.com
  5. BD 실험실 BBL 운동성 Indole Ornithine (MIO) Medium. 구매 가능 지역 : bd.com
  6. Valtek Laboratories 중간 M.I.O. 운동, Indole, Ornithine. 구매 가능 지역 : andinamedica.com