박테리아 번짐 특성 및 준비

그 세균 번짐 는 광학 현미경으로 관찰하기 위해 투명 유리판 또는 슬라이드상에서 수행되는 박테리아 미생물 현탁액의 박막 형태의 확장 물이다.

필름 형태의 확장은 미생물을 가능한 한 많이 분리하기 위해 수행된다. 왜냐하면 그들이 그룹화된다면 관찰이 명확하지 않기 때문이다.

박테리아 배양 기술에 관한 스미어 (smear) 준비 기술은 고정 및 착색을 사용하여 더 잘 분석합니다. 미생물의 크기가 작기 때문에 광학 현미경을 사용해야 관찰이 필수적입니다.

광학 현미경은 얼룩 관찰에 없어서는 안될 도구입니다. 이들은 광학 렌즈와 빛을 사용하여 크기가 크게 증가한 샘플의 시각화가 가능합니다..

일반적으로 살아있는 세포는 대부분 착색 된 구조를 가지고 있지 않으며, 광학 현미경을 통해 볼 때 무색 투명 샘플이며, 내부 대비가 거의 보이지 않고 주변 환경이 거의 보이지 않습니다..

보조 염색 기술을 사용하지 않고 단순한 명 시야 현미경을 이용한 관찰은 매우 제한적이며 미생물의 이동 관찰 에서처럼 일부 경우에만 사용됩니다.

미생물을 최적으로 관찰하기 위해서는 콘트라스트와 해상도 사이의 균형을 이루어야합니다. 세포의 세부 사항은 고해상도에서도 현미경으로 관찰 할 수 없습니다. 염색법의 사용은 염색 기술을 통해 요구되며 관찰을위한 대비를 제공합니다.

색인

• 양질의 박테리아 번짐의 특징
  • 1.1 우수한 대비
  • 1.2 좋은 수정
  • 1.3 좋은 염색
• 2 준비
  • 2.1 A. Frotis
  • 2.2 B. 고정
  • 단순 염색
  • 2.4 D. 스미어의 확실한 보존
• 3 참고

좋은 품질의 세균 번짐의 특성

탁월한 대비

훌륭한 대조를 이루기 위해 정교한 현미경이 있습니다. 위상차 현미경, 미분 간섭 및 암시 현미경. 이 유형의 현미경은 외장 및 필라멘트와 같은 세균 구조를 관찰하는 데 사용됩니다..

얼룩은 맑은 현장 현미경으로 달성되는 대비를 증가시키는 간단한 기술입니다. 이 기술에서는 현미경으로 현저하게 관찰을 향상시키는 다른 염료를 사용할 수 있습니다.

얼룩은 슬라이드에서 미생물 현탁액의 얼룩이나 연장 부분에 직접 만들어지며, 건조 및 고정되어 있습니다..

좋은 수정

고정은 세포 구조를 보존하는 데 사용되는 기술입니다. 미생물의 비활성화 및 슬라이드의 유리에 대한 접착을 일으킨다. 다양한 고정 치료법이 있습니다 : 열 고정 및 화학 고정.

열 고정

이것은 세균 번짐 관찰에 가장 많이 사용되는 방법입니다. 이 기술은 스미어의 세균 현탁액을 라이터의 불꽃으로 통과시키는 것으로 구성됩니다. 이 기술은 박테리아의 외부 형태를 보존 할 수 있지만 내부 구조를 파괴합니다.

화학 고정

화학 고정은 포름 알데히드 또는 포름 알데히드, 에탄올 및 아세트산과 같은 보존 화학 물질을 사용합니다. 화학적 고정 제를 사용하는 이점은 미생물의 내부 세포 구조의 보존이 달성된다는 것입니다.

좋은 염색

이전에 건조되고 고정 된 스미어를 염색하는 가장 일반적인 절차는 양성 또는 단순 염색, 차별적 염색 및 음성 염색입니다. 특정 세포 구조 (캡슐, 포자, 편모)를 염색하기위한 특별한 기술도 있습니다..

양성 염색 또는 단순 염색

양성 또는 단순 염색법이 가장 많이 사용되는 염색법입니다. 현미경 하에서 관찰 할 수 있도록 특정 미생물 구조에 결합하는 능력을 가진 염료를 사용합니다..

이 염료들은 교대로 이중 결합과 단순 결합 (접합)을하는 화학 구조에서 발색단 (착색 부분)을 갖는다. 이들 결합은 차례로 일부 세포 구조와 이온 결합 또는 공유 결합을 형성 할 수있다.

양성 또는 단순 염색에 사용되는 염료는 주로 아닐린 (착색 된 유기 염).

반면에, 염료들 중에는 염기성 pH와 산성 pH를 가진 것들이 있습니다..

기본 착색제

염기성 염료에서 발색단 그룹은 양전하를 띤다. 대다수의 원핵 미생물은 중성 내부 pH를 가지며, 세포 표면은 음전하를 띠고있다. 이 정전기적인 상호 작용을 통해 발색단은 세포에 결합하여 염색한다..

염료의 예로는 메틸렌 블루, 보라색 결정, 말라카이트 그린, 염기성 푸신, 사큐 라닌 등이있다..

산성 염료

산성 염료에서 발색단 그룹은 음전하를 띤다. 이들은 양전하를 띤 아미노기를 가진 단백질의 염색에 사용됩니다. 산성 염료의 예는 산성 푸신, 장미 벵갈, 콩고 레드, 에오신.

차동 염색

차별적 인 염색의 기술은 현미경 하에서 다른 미생물을 구별하기 위해 색이나 강도가 다른 두 가지 염료를 적용하는 것으로 구성됩니다. 그람 염색 및 산 - 알코올 내성 염색은 세균학에서 가장 많이 사용되는 변색 얼룩입니다.

그람 염색은 세포벽의 유형 외에도 모양, 크기, 세포 그룹을 알기위한 예비 시험으로 사용됩니다. 그람 염색 검사를 통해 세포벽이있는 박테리아는 그람 양성균과 그람 음성균으로 분류됩니다.

음성 염색

이 기술에서 화학 염료는 세포 내부로 침투하지 않지만 미생물이 검은 색으로 나타나는 매체를 사용합니다.

네가티브 얼룩의 기술에서, 도말은 중국 잉크 또는 니그로 신의 현탁액의 방울로 만들어지며, 실온에서 건조를 허용 한 후에는 빛의 통과에 불투명 한 막을 형성합니다. 이러한 방식으로, 미생물은 어두운 배경에 밝은 형태로 관찰됩니다.

준비

A. 얼룩

1. 슬라이드를 잘 씻고 흡수성 종이로 말린 다음 레이블을 붙입니다. 라벨은 준비 내용, 처리 한 사람의 이름 및 날짜를 ​​표시해야합니다.

2. 가볍게 점화하고 붉은 뜨거운 때까지 화염에 접종 루프를 소독하십시오..

3. 핸들을 식히십시오..

4.- 박테리아 배양 튜브를 가져 와서 뚜껑을 제거하고 가볍게 (화염)의 불꽃 근처에서 튜브의 입을 빠르게 통과시킵니다..

박테리아 배양액이 담긴 튜브 안의 접종 루프를 삽입하고 샘플을 채취한다..

배양액이 액체 배지 인 경우, 손잡이로 찍은 샘플을 슬라이드 중앙에 놓고 약 2 cm 직경의 원에 조심스럽게 뿌립니다.

접종 루프 재사용.

8. 공기 중 얼룩의 건조 허용.

9. 3-8 단계를 3 번 ​​반복하십시오..

배양 물이 고체 배지에 있으면, 증류수 한 방울을 미리 슬라이드에 놓아야한다. 이것은 접종의 손잡이로 찍은 문화의 작은 샘플을 단계 2 ~ 5 (징후의 조건)의 표시에 따라 혼합하기 위해 이루어집니다..

11. 슬라이드 위의 물방울로 희석 된 샘플을 연장하고 3 번 반복한다..

B. 고정

1. - 액체 배지에서 배양 한 건조한 도말에 첨가하십시오. 메탄올 또는 절대 에탄올 2 방울.

2. 라이터에서 멀리 공중에서 건조 허용.

3.- 배지가 고체 배지에서 나온 경우, 건조한 번짐은 열에 의해 고정되고, 라이터의 화염의 가장 뜨거운 부분을 통해 2 ~ 3 번 빠르게 전달됩니다.

4.- 왼손의 지느러미 부분 (오른손 잡 이용, 그렇지 않으면 오른손 잡 이용)으로 도말의 아래 부분을 터치하고 차가운 지 확인하십시오.

C. 단순 염색

1.- 도말에 선택한 염료 2 방울을 추가하고 각 염료의 특정 프로토콜에 필요한 시간 동안 작용하게하십시오 (보통 1 ~ 5 분 사이).

2. - 일부 염료는 활성화를 위해 열을 사용해야합니다.이 경우 라이터의 화염에 슬라이드를 가열 할 때 (핀셋으로 조작하고 끓이지 않도록) 조심해야합니다. 얼룩의 과열은 관찰하고자하는 세포를 파괴 할 수 있습니다..

3. 피펫에서 증류수로 세척하여 과도한 염료를 제거합니다. 작업대에서 기울어 진 슬라이드의 가장자리를 가볍게 두드려 세척수를 제거하십시오.

4.- 공기 건조 가능.

관찰 유형에 따라,이 단계에서는 커버 슬립이 사용되거나 사용되지 않습니다. 커버 슬립은 얼룩을 보호하고 보존합니다. 이 단계에서 기름에 담금으로써 관찰하면, 커버 슬립은 사용되지 않지만 도말은 보존 될 수 없다.

D. 스미어의 확실한 보존

1. 아래에 표시된 각 용액에 최소 5 분 동안 연속적으로 스미어를 담그십시오. 이 "욕조"의 목적은 얼룩을 완전히 탈수 된 상태로 두는 것입니다. 다음 시약에서 얼룩을 나타 내기 전에 각 시약을 배수해야합니다..

탈수 욕의 순서는 다음과 같습니다.

1. 에탄올 70 %
2. 95 % 에탄올
3. 순수 아세톤
4. 아세톤 - 크 실롤 1 : 1
5. 실롤

그런 다음 공기 건조 가능.

2. 캐나다 balsam 또는 다른 조립 수단을 사용하여 22 x 22 mm의 coverslip을 장착하십시오.

참고 문헌

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